[發(fā)明專利]焦磷酸測序法同時檢測API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物對及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410580123.7
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104357558A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵棠;陳慶
• 申請（專利權(quán)）人: 邵棠
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種焦磷酸測序法同時檢測API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物對，包含所述引物對的試劑盒及該試盒劑的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

API2-MALT1融合基因包括API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)等多種類型，常見于黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤中；NPM-ALK融合基因常見于間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)中。?

當(dāng)前國內(nèi)外廣泛使用的分子生物學(xué)檢測API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的方法中，熒光原位雜交技術(shù)(FISH)只能進行定性檢測、操作復(fù)雜；熒光定量PCR存在著檢測通量的局限性，所以都還不能真正滿足臨床診斷檢測的需要。傳統(tǒng)的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技術(shù)存在著可重復(fù)性差、靈敏度不夠好以及操作繁瑣的突出弱點。?

焦磷酸測序技術(shù)(Pyrosequencing)是新一代DNA序列分析技術(shù)，具備同時對大量樣品進行測序分析的能力，為高通量、低成本、快速、直觀地進行核苷酸分析和臨床檢驗提供了非常理想的技術(shù)操作平臺。?

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出一種焦磷酸測序法同時檢測API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引入對以及含有所述引物對的試劑盒，可以同時檢測API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)和NPM-ALK多種融合基因，具有高靈敏度、高特異性、高準(zhǔn)確度、檢測迅速等優(yōu)點。?

技術(shù)方案：為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提出了一種焦磷酸測序法同時檢測API2-MALT1和NPM-ALK融合基因的引物對，所述的API2-MALT1為API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)中的任意一種或幾種，其特征在于，所述引物對包括：?

(1)對于API2-MALT1(A1446-M814)基因：?

擴增引物為：?

上游引物：5′-GAAGCCTGGTAAAACAGACAGTTC-3′，?

下游引物：5′-CATCAGCTTTTGGGAAGTTGGT-3′，?

其中下游引物的5′端進行生物素標(biāo)記；?

測序引物為：?

5′-CAACACTTCTCTGGAAGC-3′；?

(2)對于API2-MALT1(A1446-M1123)基因：?

擴增引物為：?

上游引物：5′-GAAGCCTGGTAAAACAGACAGTTC-3′，?

下游引物：5′-TTTCCTATCAAAAGGGCAACC-3′，?

其中下游引物的5′端進行生物素標(biāo)記；?

測序引物為：?

5′-TGAGGAAAAAGAATCA-3′；?

(3)對于API2-MALT1(A1446-M1150)基因：?

擴增引物為：?

上游引物：5′-CAGAAGATGAAATAAGGGAAGAGG-3′，?

下游引物：5′-TATTTCCTATCAAAAGGGCAACC-3′，?

其中下游引物的5′端進行生物素標(biāo)記；?

測序引物為：?

5′-GTCAGTTGTTTGCTCTTTA-3′；?

(4)對于NPM-ALK基因：?

擴增引物為：?

上游引物：5′-CAAAGTGAGATTACAGGCATGAGC-3′，?

下游引物：5′-GCTGGGATCTTGGTCAGTTGTGT-3′，?

其中下游引物的5′端進行生物素標(biāo)記；?

測序引物：?

5′-GGTCAGTTGTGTTTCCTAT-3′。?

本發(fā)明進一步提出了一種焦磷酸測序法同時檢測API2-MALT1和?NPM-ALK融合基因的試劑盒，所述的API2-MALT1為API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)和API2-MALT1(A1446-M1150)中的任意一種或幾種，其特征在于，所述試劑盒包含質(zhì)控品和如下引物：?