[發明專利]一種檢測人HEV IgM及IgG的免疫層析試紙及其制備方法

在審

• 申請號: 201410576601.7
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104730244A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 張華;廖鐘財
• 申請（專利權）人: 浙江東方基因生物制品有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/558
• 代理公司: 湖州金衛知識產權代理事務所(普通合伙) 33232
• 代理人: 趙衛康

技術領域

本發明屬于體外診斷技術領域，尤其是涉及一種一種檢測人HEV?IgM及IgG的免疫層析試紙及其制備方法。

背景技術

目前，臨床上對戊型肝炎病毒IgM抗體的診斷主要采用酶聯免疫法（ELISA）、放免法（RIA）和化學發光法等。最普及的方法仍是酶聯免疫法（ELISA）。放免法（RIA）因其標記物有效期短和有放射性污染物而被市場逐步淘汰。化學發光法（CLIA），它是在化學發光反應的基礎上與免疫反應相結合建立的新技術，它不僅具有免疫反應的特異性，而且具有化學發光反應的高靈敏性。采用化學發光測量儀，具有靈敏度高、穩定性好、快速、準確和簡便等優點，無放射性污染，但所用試劑和自動化分析儀均為國外產品，價格昂貴尚難全面普及；EIA法，須經孵育、洗滌、顯色、判讀等步驟，過程較為繁瑣，檢測時間長。

戊型肝炎病毒(HEV)感染的診斷主要依賴于抗HEV?IgG及IgM的檢測，單獨檢測一項指標用于戊肝診斷均存在一定的局限性，易發生漏檢現象。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供一種漏檢率低的檢測人HEV?IgM及IgG的免疫層析試紙及其制備方法。?

???本發明的目的之一是提供一種檢測人HEV?IgM及IgG的免疫層析試紙，所述試紙包括樣品墊、金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和底板；

所述硝酸纖維素膜在所述底板的中部，在所述硝酸纖維素膜沿底板的一端依次為金標抗原結合墊、樣品墊，在所述硝酸纖維素膜沿底板的另一端為吸水墊，且每相鄰兩者之間部分疊合；

所述硝酸纖維素膜包含包被有抗人IgM抗體及包被有抗人IgG抗體的檢測區和包被有抗兔IgG抗體的質控區；所述硝酸纖維素膜靠近吸水墊一端為質控區，另一端為檢測區；所述檢測區設有檢測線(T1、T2線)，所述質控區設有質控線（C線）；

所述的金標抗原結合墊2上包被有膠體金標記的HEV抗原及膠體金標記的兔IgG抗體或乳膠標記的HEV抗原及乳膠標記的兔IgG抗體或膠體硒標記的HEV抗原及膠體硒標記的兔IgG抗體。

優選，樣品墊為親水性微孔結構材料。

優選，所述親水性微孔結構材料為無紡布或玻璃纖維。

優選，質控區設有一個質控線（C線）。

優選，所述抗人IgM的宿主為：鼠、羊、兔、雞、馬等；抗人IgG的宿主為：鼠、羊、兔、雞、馬等；抗兔IgG抗體的宿主為：鼠、羊、兔、雞、馬等；HEV抗原為：基因工程重組抗原或天然培養抗原。

優選，所述硝酸纖維素膜上包被有抗人IgM抗體及包被有抗人IgG抗體的檢測區的檢測區在包被有抗IgG抗體的質控區的下方。

優選，所述試紙寬度為2mm-6mm。

本發明的另一發明目的是提供一種檢測人HEV?IgM及IgG的免疫層析試紙的制備方法，包括以下步驟：

a)準備樣品墊、吸水墊；

???b)準備金標抗原結合墊

?1）HEV金標抗原：?用堿性溶液將膠體金溶液pH調至至7.0-10.0，混合HEV?抗原與膠體金溶液，然后加入蛋白保護劑，再采用高速冷凍離心的方法對所得金標抗原進行純化，并用膠體金懸浮液進行復溶得到HEV金標抗原；

2）兔IgG金標抗體：用堿性溶液將膠體金溶液pH調至至7.0-10.0，混合兔IgG與膠體金溶液，然后加入蛋白保護劑，再采用高速冷凍離心的方法對所得金標抗原進行純化，并用膠體金懸浮液進行復溶得到兔IgG金標抗體；

???3）將所得HEV金標抗原及兔IgG金標抗體按一定比例混合后噴點到金標抗原結合墊上，干燥后即為金標抗原結合墊；

c）準備硝酸纖維素膜

在硝酸纖維素膜輔料的一側噴點抗人IgM抗體作為T1檢測線，中間噴點抗人IgG抗體作為T2檢測線，另一側噴點抗IgG抗體作為質控線（C線）；

d）順次將所述樣品墊、金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊相互搭接在底板上，并用切刀機切割成所需寬度的試紙條。

優選，所述膠體金溶液的制備方法為:將100ml?0.01%的HAuCl₄水溶液加熱至沸騰，在劇烈攪拌下迅速加入0.5-10ml的檸檬酸三納溶液，保持沸騰狀態反應3-30min后停止加熱，然后冷卻。