[發(fā)明專利]防治植物真菌病害的多粘類芽袍桿菌及其生產(chǎn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410572758.2
• 申請(qǐng)日: 2014-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN105586285A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 孫婷婷
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

根據(jù)味精生產(chǎn)過程中廢水所含污染物情況可分成三類：一是高濃度高酸度有機(jī)廢

水即離交尾液；二是其它中高濃度有機(jī)廢水；三是不需處理直接外排的冷卻降溫水。離交尾液是通過離子交換法提取谷氨酸后剩余的“廢液”，它既含有豐富的有機(jī)質(zhì)，還含有N、P、K等少量無機(jī)敖及其它微量元素，這些物質(zhì)都可為微生物生長提供營養(yǎng)。其它中高濃度有機(jī)廢水包括：淀粉廢水、制糖廢水、發(fā)酵洗灌廢水、精制廢水等。淀粉廢水和制糖廢水除了含有一定的有機(jī)污染物質(zhì)外，還有一些懸浮物質(zhì)；發(fā)酵洗灌廢水與離交尾液所含成分基本相同，只是含量較低；精制廢水有時(shí)呈酸性，有時(shí)呈堿性，有機(jī)物污染物質(zhì)含量較高，這些有機(jī)廢水也是微生物資源開發(fā)比較理想的營養(yǎng)來源之一。但是，這些廢水如果得不到合理利用，不僅會(huì)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，而且使資源白白浪費(fèi)掉。目前，眾多味精廢水處理技術(shù)大致分為兩步，一是提取廢水中的谷氨酸菌體單細(xì)胞蛋白，通過此步分離菌體，常用物化方法進(jìn)行處理(如絮凝、離心等方法)；二是提取菌體后廢液的處理，使其達(dá)到排放標(biāo)準(zhǔn)或處理后用于工廠回用，這也是眾多味精廢水處理技術(shù)所面臨的關(guān)鍵問題，常采用生物處理方法(如厭氧發(fā)酵、生物膜法，SBR法等)。多粘類芽飽桿菌在自然界中分布廣泛，是一種重要的生防菌，對(duì)多種植物真菌、細(xì)菌病害均有較好的防治作用。多粘類芽抱桿菌對(duì)動(dòng)植物真菌、細(xì)菌病原物具有廣譜抗性，利用大孔吸附樹脂對(duì)多粘類抱桿菌產(chǎn)生的抗真菌活性物質(zhì)的吸附、解吸性能，篩選出其最佳解吸劑，該活性物質(zhì)對(duì)熱、紫外線穩(wěn)定，對(duì)胰蛋白酶、蛋白酶K有一定的耐受性，對(duì)氯仿部分敏感，對(duì)酸穩(wěn)定，對(duì)堿敏感。可以作為微生物肥料菌劑中的一種成分分解秸稈，有效解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一方面農(nóng)業(yè)垃圾過多，污染水體和環(huán)境，處理困難，另一方面化肥，農(nóng)藥使用過多，土壤惡化的矛盾。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的日的是提供一種能夠在植物葉際與根際定植，并且對(duì)多種病原菌具有拈抗作用的生防菌一多粘類芽抱桿菌EBL一06菌株，同時(shí)提供一種利用味精廢水生產(chǎn)該生防菌劑的方法。本發(fā)明所提供的生防菌株是由我們實(shí)驗(yàn)室從小麥的葉面上分離篩

選出來的。將其編號(hào)為EBL一06，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物

中心，保藏日期為二零零八年二月二十六日，分類命名為多粘類芽抱桿菌。保藏編號(hào)為：cGMccN0．2377。該菌株具有下列性質(zhì)：l菌落形態(tài)特征該菌株在PDA培養(yǎng)基上生長良好，單個(gè)菌落呈半玻璃珠狀，邊緣整齊，表面粘稠，與培養(yǎng)基結(jié)合緊密，菌落中心乳黃色。2菌體形態(tài)特征菌體桿狀，革蘭氏染色顯陽性，芽抱端生，包囊膨大。3碳源利用能力可以利用碳源：Q一環(huán)式糊精；肝糖；D一葡糖胺酸；衣康酸；D一半乳糖酸Y一內(nèi)醋；D一半乳糖醛酸；2一環(huán)式糊精；肝糖；D一葡糖胺酸；衣康酸；D一半乳糖酸Y一內(nèi)醋；D一半乳糖醛酸；2一輕基苯甲酸；4一輕基苯甲酸；L一精氨酸；L一天門冬酞胺；L一絲氨酸；甘氨酞一L一谷氨酸；D一木糖；D一甘露醇；苯乙胺。不可利用碳源：丙酮酸甲酷；D一纖維二糖；p一甲基一D一葡萄糖昔；i一赤醉糖醇；N一乙酞一D葡萄糖氨；D，L—u一磷酸甘油；u一丁酮酸；Y一經(jīng)丁酸；L一苯丙氨酸；L一蘇氨酸；腐胺。對(duì)真菌拈抗能力菌株在PDA固體培養(yǎng)基上表現(xiàn)出對(duì)灰葡萄抱霉、黃瓜黑星病的病原菌原菌、木霉菌等的高效拈抗效果。5[002lJ2、液體種子制備：向高壓滅菌的土顯液體培養(yǎng)基中，接種多粘類芽抱桿菌，25—35攝氏度培養(yǎng)，得到液體種子。4、液態(tài)發(fā)酵：向經(jīng)過預(yù)處理的廢水中接種5％(體積)的液體種子，于25—35℃，通無菌空氣培養(yǎng)24—72小時(shí)。[0。2315、后處理：培養(yǎng)好的發(fā)酵液經(jīng)細(xì)菌計(jì)數(shù)后，包裝使用。

具體實(shí)施方式：由本發(fā)明技術(shù)方案生產(chǎn)的多粘類芽抱桿菌生防劑能夠高效防治多種真菌類植物病害，而且無公害，生產(chǎn)成本低，并且有效地利用了味精廢水。以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施，目的在于幫助讀者更好地理解本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)，但不作為對(duì)本發(fā)明實(shí)施范圍的限定。實(shí)施例l：多粘類芽抱桿菌生物農(nóng)藥制備]種子培養(yǎng)基制備：稱取200g土豆，切碎，于兒自來水中煮沸30分鐘，過濾除去殘?jiān)尤?0g葡萄糖，定容至IL，即得土豆培養(yǎng)基。分裝入5個(gè)lL的三角瓶中，滅菌20min。發(fā)酵培養(yǎng)基制備：經(jīng)過絮凝除去細(xì)菌蛋白的味精廢水比加入10L自來水稀釋，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6．0。[0。25]液體種子制備：向土豆液體培養(yǎng)基中接種多粘類芽抱桿菌，于30℃，搖瓶，恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，得到液體種子。發(fā)酵產(chǎn)品：將上述發(fā)酵培養(yǎng)基裝罐到10L的發(fā)酵罐中，12l℃滅菌10min，按照5％的接種量接種液體種子，在30℃恒溫，通無菌空氣的條件下，發(fā)酵2至3天，取樣計(jì)數(shù)后，無菌條件下分裝。