[發明專利]一種重組細胞系、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410570904.8
• 申請日: 2014-10-23
• 公開（公告）號: CN104450622A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 王金勇;陳曉梨;耿陽;趙乾浩;黃可
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N5/078
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種重組細胞系，其特征在于，在骨髓基質細胞OP9細胞中導入Lhx2的基因并過表達Lhx2。

2.一種如權利要求1所述重組細胞系的制備方法，其特征在于，包括：

通過病毒載體向骨髓基質細胞OP9中轉染Lhx2基因。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述病毒載體為逆轉錄病毒載體。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述逆轉錄病毒載體為pMYs系列逆轉錄病毒載體。

5.根據權利要求2述的制備方法，其特征在于，具體為：以pMYs-IRES載體為骨架，將Lhx2cDNA閱讀框亞克隆方式插入，構建pMYs-Lhx2-IRES載體，載體經酶切、測序鑒定正確導入包裝細胞，收集包裝病毒上清，感染OP9細胞系。

6.如權利要求1所述的重組細胞系在誘導多能干細胞和/或胚胎干細胞向血液細胞分化中的應用。

7.一種利用如權利要求1所述的重組細胞系誘導多能干細胞和/或胚胎干細胞向血液細胞分化的方法，其特征在于，包括：

取所述重組細胞系與多能干細胞和/或胚胎干細胞共培養。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，具體為：

所述重組細胞貼壁生長后，接種多能干細胞和/或胚胎干細胞至所述重組細胞上，共培養5天～13天，收集并富集CD34⁺細胞；取所述CD34⁺細胞再次接種于重組細胞，培養5天～13天，收集細胞。

9.一種利用如權利要求1所述的重組細胞系誘導多能干細胞和/或胚胎干細胞向血液細胞分化的方法，其特征在于，包括：

將所述重組細胞系與多能干細胞和/或胚胎干細胞共注射受體動物皮下或睪丸中，培養，形成畸胎瘤。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，在所述共注射之后，還包括：

持續補充細胞因子SCF、細胞因子TPO的步驟。