[發明專利]一種提高桑黃液體發酵產物中金絲桃苷含量的方法

有效

• 申請號: 201410565842.1
• 申請日: 2014-10-21
• 公開（公告）號: CN104278068A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 程俊文;賀亮;魏海龍;胡傳久;付立忠;李海波
• 申請（專利權）人: 浙江省林業科學研究院
• 主分類號: C12P19/60
• 分類號: C12P19/60;C12R1/645
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 郭小麗

技術領域

本發明屬于生物發酵工程技術領域，具體涉及一種提高桑黃液體發酵產物中金絲桃苷含量的方法。

背景技術

桑黃(Phellinus?igniarius)屬擔子菌亞門，層孔菌綱，銹革孔菌科，針層孔菌屬。桑黃菌提取物在抑制癌細胞轉移和防止癌癥手術后復發等的臨床應用中具有顯著效果，是目前國際公認的生物治癌藥劑中有效率最高的一種藥用真菌。

由于受生理狀態的特殊性和復雜性以及外部環境的制約，造成桑黃在自然界中形成子實體稀少，特別是形成可用子實體需要多年。而且人工栽培極其困難，培養條件苛刻，且生長周期長達3-4年，難以滿足日益膨脹的市場需要。采用桑黃液體發酵的方法生產桑黃藥用活性成分因為具有生產周期短、勞動力省以及受外部環境影響小等優點被認為是一種有效的方法。目前，國內外對桑黃菌絲體培養生產活性藥用成分研究和工藝應用主要集中在發酵條件及產物提取分離等層面上，整體發酵水平不高。

桑黃液體發酵產物中含有金絲桃苷，金絲桃苷屬黃酮醇苷類化合物，又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，廣泛存在于滕黃科、豆科、杜鵑花科和衛矛科等多種植物中，具有保護心血管系統、保護胃黏膜、抗炎等多種生理活性，是一種重要的天然產物(林萍，易宏偉，張斐.金絲桃苷藥理作用研究進展[J].中國現代中藥，2012,14(10)：23-25.)。

目前，針對提高桑黃液體發酵產物中金絲桃苷含量的方法的研究國內外尚未見報道。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種提高桑黃液體發酵產物中金絲桃苷含量的方法，該方法操作簡便，易于工業化生產。

本發明采用的技術方案是：

一種提高桑黃液體發酵產物中金絲桃苷含量的方法，包括步驟：

(1)桑黃液體種子液的制備：將活化后的桑黃菌種接種于添加馬褂木提取物的液體種子培養基中培養3天-7天，得桑黃液體種子液；

(2)青頂擬多孔菌種子液的制備：將活化后的青頂擬多孔菌菌種接種于液體種子培養基中培養3天-7天，得青頂擬多孔菌液體種子液；

(3)液體發酵培養：向發酵培養基中先接入占發酵培養基體積1％-10％的青頂擬多孔菌液體種子液，在溫度22℃-30℃的條件下培養1天-4天后，將溫度調為25℃-29℃，接入占發酵培養基體積5％-20％的桑黃液體種子液，然后繼續培養2天-5天，終止發酵后，得到桑黃液體發酵產物。

本發明根據藥用真菌桑黃液體發酵產物金絲桃苷合成代謝途徑的特點，通過青頂擬多孔菌先利用碳源進行生長，生成中間產物，然后再加入桑黃液體菌種，通過桑黃的液體發酵將青頂擬多孔菌產生的中間產物轉化成所需的含金絲桃苷的代謝終產物，大幅度提高桑黃菌絲體中金絲桃苷含量。

所述的桑黃菌種可采用任意一種桑黃菌種，可采用市售產品。例如桑黃(Phellinus?linteus)ACCC51181菌種，來源于中國農業微生物菌種保藏管理中心。

所述的青頂擬多孔菌(Polyporellus?picipes)是一種木腐真菌，可利用自身分泌的木質素降解酶系及獨特的作用方式降解有機物。所述的青頂擬多孔菌菌種可采用任意一種青頂擬多孔菌菌種，可采用市售產品，例如北京北納創聯生物技術研究院生產的青頂擬多孔菌菌種。

為了達到更好的發明效果，進行以下優選：

步驟(1)中，每升液體種子培養基中馬褂木提取物的添加量為1g-10g。

所述的馬褂木提取物可以選用市售產品，也可以采用現有方法制備；優選以馬褂木葉為原料制備的馬褂木提取物，進一步優選由馬褂木葉乙醇提取物和馬褂木葉水提物組成的馬褂木提取物，可采用以下制備方法制備的馬褂木提取物，包括：稱取一定量的馬褂木葉，粉碎(優選過40目-100目)，先加占馬褂木葉重量10倍量-16倍量的質量百分濃度為60％-80％的乙醇水溶液在60℃-80℃浸提1h-2h，過濾后得到上清液，上清液濃縮后真空冷凍干燥得提取物Ⅰ；上述醇提后的馬褂木葉殘渣加入占馬褂木葉重量10倍量-20倍量的水在85℃-95℃下浸提1h-2.5h，過濾后得到上清液，上清液濃縮至1/4體積后加入濃縮物體積2倍量-5倍量的無水乙醇，離心收集沉淀物，沉淀物真空冷凍干燥后得提取物Ⅱ，合并上述提取物Ⅰ和提取物Ⅱ得馬褂木提取物。

步驟(1)中，所述的活化后的桑黃菌種在添加馬褂木提取物的液體種子培養基中培養的溫度為自然環境溫度，優選為20℃-30℃。一般1L添加馬褂木提取物的液體種子培養基中接入2cm²-5cm²大小的活化后的桑黃菌種菌塊。