[發明專利]β-腎上腺素受體激動劑多簇抗原、寬譜特異性抗體及其應用

在審

• 申請號: 201410564625.0
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN104311659A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 邵科峰;趙波;張紅琳;任鵬飛;常其沛
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 韓朝暉

1.一種β-腎上腺素受體激動劑多簇抗原，其特征在于：所述的多簇抗原是以沙丁胺醇和萊克多巴胺為半抗原，與載體蛋白偶聯得到的沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物；所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清蛋白。

2.根據權利要求1所述的β-腎上腺素受體激動劑多簇抗原，其特征在于：所述的多簇抗原以沙丁胺醇和萊克多巴胺為半抗原，牛血清白蛋白或卵清蛋白為載體蛋白，按以下步驟制備得到：

1)在載體蛋白上以混合酸酐法偶聯沙丁胺醇半抗原，再進行純化：

將0.2mmol硫酸沙丁胺醇溶于5～10ml無水乙醇中，加入0.2mmol戊二酸酐，室溫下反應3～5h，離心，將下層固體溶于5～10ml?N，N-二甲基甲酰胺，加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸異丁酯，繼續反應1～3h；將上述反應液加入到5～10ml含有5～10mg/ml載體蛋白的磷酸緩沖溶液中，室溫反應過夜；將上述反應液用磷酸緩沖溶液透析3～6次，冷凍干燥，即可得到沙丁胺醇-載體蛋白偶聯物凍干粉；

2)在步驟1)的產物上以混合酸酐法偶聯萊克多巴胺半抗原，再進行純化：

將0.2mmol戊二酸酐溶于5ml吡啶中，加入0.2mmol鹽酸萊克多巴胺，室溫反應10～20h，蒸干溶劑，將所得油狀物溶于5～10ml?N，N-二甲基甲酰胺，加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸異丁酯，繼續反應1～3h；將上述反應液加入到5～10ml含有5～10mg/ml沙丁胺醇-載體蛋白偶聯物的磷酸緩沖溶液中，室溫反應過夜；將上述反應液用磷酸緩沖溶液透析3～6次，冷凍干燥，制得所述的β-腎上腺素受體激動劑多簇抗原。

3.一種β-腎上腺素受體激動劑寬譜特異性抗體，其特征在于，所述寬譜特異性抗體由β-腎上腺素受體激動劑多簇抗原通過動物免疫獲得。

4.根據權利要求3所述的β-腎上腺素受體激動劑寬譜特異性抗體，其特征在于，所述寬譜特異性抗體是由沙丁胺醇-萊克多巴胺-牛血清白蛋白通過動物免疫獲得的多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb。

5.一種用于β-腎上腺素受體激動劑多殘留檢測的酶聯免疫試劑盒，其特征在于，所述的酶聯免疫試劑盒包含下述1)、2)、3)或4)中任一所述的試劑：

1)酶聯免疫試劑盒中包括沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物、寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb和酶標記羊抗兔IgG；其中，所述偶聯物作為包被原；

2)酶聯免疫試劑盒中包括沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物、寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb的酶標記物；其中，所述偶聯物作為包被原；

3)酶聯免疫試劑盒中包括沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物的酶標記物、寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb和羊抗兔IgG；其中，所述羊抗兔IgG作為包被原；

4)酶聯免疫試劑盒中包括沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物的酶標記物、寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb；其中，所述寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb作為包被原。

6.根據權利要求5所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于，所述酶聯免疫試劑盒還包括β-腎上腺素受體激動劑標準品溶液、顯色液、終止液、洗滌液、稀釋液和提取液，所述β-腎上腺素受體激動劑為克倫特羅、沙丁胺醇或萊克多巴胺。

7.一種用于β-腎上腺素受體激動劑多殘留檢測的免疫膠體金試紙，由PVC底板、樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊組成，其特征在于，所述的金標墊包被有膠體金標記的第二種屬動物蛋白與寬譜特異性多克隆抗體SAL-RAC-BSAAb的混合物，或第二種屬動物蛋白與沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物的混合物；硝酸纖維素膜上包被有沙丁胺醇-萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物或SAL-RAC-BSAAb構成的檢測線和包被抗第二種屬動物蛋白IgG構成的質控線；所述第二種屬動物為與免疫動物不同的動物。

8.根據權利要求7所述的免疫膠體金試紙，其特征在于，所述β-腎上腺素受體激動劑為克倫特羅、沙丁胺醇或萊克多巴胺。