[發明專利]一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法及檢測方法

在審

• 申請號: 201410564029.2
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN105588898A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 王偉;張鵬飛;王丹慧;李梅
• 申請（專利權）人: 內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 北京漢德知識產權代理事務所(普通合伙) 11328
• 代理人: 劉子文;徐馳

技術領域

本發明涉及一種檢測牛奶中藥物殘留的樣品前處理方法及檢測方法，尤其適用于牛奶中磺胺類藥物的檢測。

背景技術

目前，牛奶中磺胺類藥物殘留檢測方法以GB/T22966-2008《牛奶和奶粉中16種磺胺類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》的方法為主，因其檢測需要質譜，價格昂貴，且對化驗員的水平要求較高，無法在一般中、小企業中進行推廣；該方法使用危險性較高的藥品-高氯酸，因為高氯酸可助燃，具強腐蝕性、強刺激性，可致人體灼傷，會給化驗室帶來安全隱患。

GB29694-2013《食品安全國家標準動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定-高效液相色譜法》中檢驗方法適用于肌肉和肝臟組織的檢測，由于牛奶與肉類化學成分的差異，使用這種方法應用于牛奶檢測時回收率無法滿足檢測要求。

發明內容

本發明的目的是提供一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，安全性高，可較完全地提取牛奶樣品中的磺胺類藥物。

本發明的另一個目的是提供一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法，成本低，安全性高，檢測的回收率和精密度較好。

本發明提供了一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，包括：取1至5克待測牛奶樣品，加入10至30mL乙腈，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；并向離心后的殘渣中加入乙腈10至30毫升，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；合并兩次所得的上清液；將合并后的上清液置于旋蒸瓶中，在40至50℃下旋轉蒸發至干；再依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、正己烷3至5mL和正己烷3至5mL分別清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一離心管中，渦旋混合30至120秒，再于8000至10000轉/分鐘離心3至5分鐘；離心后棄正己烷層，取下層液；將下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液；以及將凈化液于40至50℃氮氣吹干，再用0.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解；其中0.1%甲酸乙腈溶液的配制方法為：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL。

在樣品前處理方法的一種示意性實施方式中，用MCX固相萃取柱凈化的步驟為：先將MCX固相萃取柱依次用甲醇2至5mL和0.1mol/L鹽酸水溶液2至5mL活化；將下層液過活化后的MCX固相萃取柱，控制流速1至2mL/分鐘；依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液1至2mL和50%甲醇乙腈溶液2至4mL淋洗MCX固相萃取柱；50%甲醇乙腈溶液的配制方法為：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀釋至100mL；以及最后用4mL洗脫液洗脫，洗脫液的配制方法為：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀釋至100mL。

在樣品前處理方法的一種示意性實施方式中，磺胺類藥物包括：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺異噁唑、磺胺甲噁唑、苯酰磺胺和磺胺二甲氧噠嗪。

本發明還提供了一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法，其特征在于，先根據上述的樣品前處理方法對待測牛奶樣品進行前處理，再用液相色譜法進行檢測。

在液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法的一種示意性實施方式中，液相色譜的色譜條件為：柱溫箱：30至45℃；紫外檢測器檢測波長：270nm；進樣量：20至50μL；色譜柱：C18或C8，規格為250×4.6mm，5μm；流動相：0.1%甲酸水溶液和乙腈；流速：1.0至1.5mL/分鐘；洗脫梯度：