[發明專利]以作物秸稈漚浸液培養盔形舟形藻的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 201410563143.3
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN104388313A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以作物秸稈漚浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的培養基，其特征在于配方如下：

秸稈漚浸液95毫升，硝酸銨4毫克，磷酸二氫鈉7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸鹽5毫克，檸檬酸鉀2毫克，甘氨酸甜菜堿12毫克，谷氨酸鈉4毫克，乙酸鈉4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸鹽9毫克，SLA溶液1毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生長刺激素10國際單位，人尿1.5毫升，次氯酸鈉消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方：FeCl2·4H2O?1800毫克，CoCl2·6H2O?250毫克，NiCl2·6H2O?10毫克，CuCl2·2H2O?10毫克，MnCl2·4H2O70毫克，ZnCl2?100毫克，H3BO3?500毫克，Na2MoO4·2H2O?30毫克，蒸餾水1000毫升，VA溶液配方：生物素10毫克，鹽酸硫胺素30毫克，鹽酸吡哆醇10毫克，維生素B12?5毫克，煙酸35毫克，對氨基苯甲酸20毫克，泛酸鈣10毫克，蒸餾水100毫升。

2.一種以作物秸稈漚浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于具體步驟如下：

建一水泥池，長200厘米，寬100厘米，深65厘米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光，有利于藻光合作用，底部與地面齊平，在底部一角安一個地漏，下面連接一個水龍頭，池上面安置一塊玻璃，將水泥池蓋住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4個孔，其中2個孔穿入2根電源導線，導線末端各連接一個40瓦三基色燈，還有2個孔，分別穿入充氣管和排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑8毫米，將水泥池先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基至水深30厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的盔形舟形藻接種，接種密度6×10⁴cell/mL；蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，40厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣∶純二氧化碳∶氨氣＝92％∶7％∶1％，白天連續充氣，夜間行間隔充氣，即充氣30分鐘，停止30分鐘，如此反復，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度25±2℃，最佳光照強度4000-12000Lux，夜間打開三基色燈進行照明，培養的前6天，水泥池上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-7000Lux，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第9天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基25升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第12天舟形藻密度增加至350×10⁴cell/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將水泥池用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；

所述消毒液由以下重量比的物質組成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料：土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份、輔料3-5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70℃下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2∶1∶1；將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4℃冰箱備用。

3.根據權利要求2所述的一種以作物秸稈漚浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。

4.根據權利要求2所述的一種以作物秸稈漚浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。