[發(fā)明專利]用于檢測SCZ相關(guān)基因多態(tài)性的引物及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410555737.X
• 申請日: 2014-10-17
• 公開（公告）號: CN104293961B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方靜;馬樂;吳昌睿;劉蓉;韓悅;王俐媛;張強;郭芳;孫靚;楊薇粒;金犇
• 申請（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種預(yù)測精神分裂癥易感性的試劑，更具體地說是用于測定與精神分裂癥的易感性相關(guān)的人AUTS2基因單核苷酸多態(tài)性的引物以及含有該引物的試劑盒，可用于疾病的輔助診斷、治療和新藥開發(fā)。

背景技術(shù)

精神分裂癥(SCZ)是一種復(fù)發(fā)率高、致殘率高的慢性遷延性疾病，以基本個性改變，思維、情感、行為的分裂，精神活動與環(huán)境不協(xié)調(diào)為主要特征，一般沒有意識和智能障礙，為一種功能性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球精神分裂癥的終身患病率約為3.8‰～8.4‰，歐洲、美洲和東南亞地區(qū)的平均患病率分別為5.0‰、4.2‰和3.7‰。我國的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，城市地區(qū)患病率為7‰，農(nóng)村為4.26‰。該病多起病于青壯年，患者勞動能力顯著喪失，給社會和家庭造成沉重的負擔，并占用大量的醫(yī)療衛(wèi)生資源，所造成的社會經(jīng)濟負擔居各種疾病的前列。

目前，導(dǎo)致精神分裂癥的確切病因尚不清楚。既往大量研究表明，精神分裂癥在家系研究、雙生子研究中呈現(xiàn)高度遺傳一致性，寄養(yǎng)子研究發(fā)現(xiàn)精神分裂癥母親所生子女從小寄養(yǎng)在正常家庭中，成年后仍有較高的患病率。可見，遺傳因素可能在精神分裂癥的發(fā)病中起著重要的作用。

隨著分子遺傳學(xué)研究技術(shù)的進展，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了許多跟精神分裂癥相關(guān)的染色體區(qū)域和候選基因。在人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)中，通過連鎖和關(guān)聯(lián)研究定位的精神分裂癥易感位點所在的染色體有5，11q，6p23，22q11，6q，8p22-p21，13q32，18p，1q42，15q15，10q22，1p，15q13-q14，2q32.1，22q13.3，7q36.3，2p16.3。相關(guān)的易感基因有MTHFR(1p36)，NOS1AP(1q23)，RGS4(1q23)，CHI3L1(1q32)，DISC1(1q42)，NRXN1(2p16.3)，ZNF804A(2q31)，ERBB4(2q33)，SYN2(3p25)，ALS2CL(3p21)，DRD3(3q13)，KPNA1(3q21)，PMX2B(4p13)，SPATA5(4q28)，CLINT1(5q33)，DRD1(5q35.1)，DTNBP1(6p22.3)，NOTCH4(6p21)，LAMA2(6q22)，ABCA13(7p12.3)，TPH1(11p15.3-p14)，BDNF(11p13)，APOE(19q13)等。從目前的研究來看，SCZ的易感基因有很多，但是關(guān)于位于7號染色體的AUTS2基因(NC_000007.14)多態(tài)性與SCZ的關(guān)系未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供用于檢測SCZ相關(guān)基因多態(tài)性的引物及試劑盒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

通過提取人基因組DNA，測定受試者的AUTS2基因內(nèi)含子區(qū)(rs6943555)堿基多態(tài)性位點的基因型，發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性位點與受試者對精神分裂癥的易感性密切相關(guān)：AUTS2基因型為T/T純合子時，受試者的易感性最低；AUTS2基因型為T/A雜合子時，受試者的易感性較高；AUTS2基因型為A/A純合子時，受試者的易感性最高。

根據(jù)以上發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種分離核酸，具有SEQ.ID.NO.1所示的堿基序列，在第163位為T，該核酸序列為AUTS2基因內(nèi)含子4部分序列。本發(fā)明提供了一對引物，分別具有如SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3所示的堿基序列，長度分別為21和33bp，而且可以特異性地擴增出含有SEQ.ID.NO.1所示序列中第163位的SNP的擴增產(chǎn)物，所述的引物分別為：

上游引物F1：TGGGTGTTGGAAGAGTTTTGA(如SEQ.ID.NO.2所示)；

下游引物R1：ATACAGTATACATAAACATTGGAAAAGAGGGAA(如SEQ.ID.NO.3所示)。

本發(fā)明提供了一種檢測SCZ易感性的診斷試劑盒，其中包含有引物F1和R1以及用于PCR擴增檢測的試劑盒的其他試劑、緩沖液等。檢測擴增產(chǎn)物與SEQ.ID.NO.l所示序列第163位相比是否存在變異時，所需的化學(xué)試劑還包括限制性內(nèi)切酶等。本發(fā)明試劑盒中的全部組分、含量、來源如下：

本發(fā)明試劑盒供10人份檢測應(yīng)用，其組分、含量和來源包括：

125μL?2×PCR?MasterMix(RUNDE，主要組成：0.1U?Taq?Polymerase/μL；500μM?dNTP?each；20mM?Tris-HCl(pH?8.3)；100mM?KCL；3mM?MgCl₂)；