[發明專利]一種自身免疫性抗原陽性血清的純化制備方法

在審

• 申請號: 201410553407.7
• 申請日: 2014-10-17
• 公開（公告）號: CN104977419A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發明（設計）人: 李慶春;王洪;孫嬋;夏波;馬竹鳳;柳樂;王秀偉
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;汪青

技術領域

本發明屬于體外診斷技術領域，具體涉及一種自身免疫性抗原陽性血清的純化制備方法。

背景技術

正常情況下，機體將自身組織成分識別為“自我”，一般不對其產生免疫應答，此為自身耐受。自身耐受的產生是由于在胚胎期發育的淋巴細胞克隆，凡能識別自身組織的均被破壞或禁忌，即Bumet的禁忌克隆學說。但在某些情況下，自身耐受遭到破壞，禁忌細胞株活躍，機體免疫系統針對某些自身組織成分產生了免疫應答，就可能導致自身免疫病的發生。發生自身免疫病的關鍵是機體產生了針對自身組織成分的自身抗體或致敏的T淋巴細胞，并在體內發生了自身免疫應答，導致自身組織細胞的損傷。機體為什么會產生自身抗體及致敏T細胞，其原因是非常復雜的，據研究與以下因素有關。

一、自身抗原的出現

(一)隱蔽抗原的釋放

隱蔽抗原(sequestered?antigen)是指體內某些組織成分如精子、眼內溶物、腦等，在正常情況下從未與免疫細胞接觸過，其相對應的淋巴細胞克隆仍存在，并具免疫活性。一旦因手術、外傷、感染等原因破壞隔絕屏障，隱蔽抗原釋放入血流或淋巴液，便與免疫系統接觸。免疫系統將其誤認為是“異物”，引發自身免疫應答，導致自身免疫病的發生。

(二)自身成分的改變

自身成分在受到物理因素(如冷、熱、電離輻射)、化學因素(如藥物)或生物因素(如細菌、病毒等)作用后，均可使其抗原性發生變化。改變了的自身成分可刺激免疫系統引起自身免疫應答，導致自身免疫性疾病。

(三)共同抗原引發的交叉反應

某些細菌、病毒與正常人體某些組織細胞上有相類似的抗原決定簇，針對這些細菌、病毒抗原決定簇產生的自身抗體和致敏淋巴細胞可與自身組織細胞發生交叉反應，引起自身免疫性疾病。

二、免疫調節異常

(一)淋巴細胞旁路活化

正常情況下，體內存在針對自身抗原的T/B淋巴細胞克隆。一般Th淋巴細胞對自身成分是處于耐受狀態，B淋巴細胞仍能對自身成分發生應答。由于無Th細胞輔助，故正常情況下不出現自身免疫應答。某些外來抗原具有與自身成分相似或相同的B細胞識別的決定簇，但由于T細胞識別的載體決定簇不同，識別自身成分載體決定簇的Th細胞處于耐受狀態，而識別外來抗原載體決定簇的Th細胞能被激活發生反應，故外來抗原可輔助B細胞產生免疫應答，即稱為Th細胞旁路活化，從而引發自身免疫應答。

(二)多克隆刺激劑的旁路活化

某些多克隆刺激劑如EB病毒和超抗原，可激活處于耐受狀態的Th細胞或者直接向B細胞發出輔助信號刺激其產生自身抗體，引發自身免疫應答。

(三)輔助刺激因子表達異常

在免疫應答過程中，免疫活性細胞的激活，除了免疫活性細胞對抗原遞呈細胞表面的抗原肽復合物識別外，還必須有兩細胞間輔助刺激因子的相互作用。如抗原遞呈細胞表面輔助刺激因子的異常表達，便可激活自身免疫應答的T細胞，引發自身免疫性疾病。

此外，Thl和Th2細胞的功能失衡和自身免疫性疾病的發生也有一定關系。

三、Fas/FasL表達異常

Fas/FasL表達異常和自身免疫病的發生有關，Fas屬TNFR/NGFR家族成員(又稱CD95)，普遍表達于多種細胞包括淋巴細胞表面。其配體即FasL(Fas?ligand)通常出現于活化的T細胞如CTL和NK細胞膜上，又可以分泌脫落至細胞外。無論是膜結合型或是游離型的FasL，與細胞膜上的Fas結合后均可誘導細胞凋亡。在Fas/FasL基因缺陷的患者體內，因為激活誘導自身免疫應答的淋巴細胞凋亡機制受損，T、B淋巴細胞克隆性增殖失控，故易發生多種自身免疫性疾病。

四、遺傳因素

人類的自身免疫性疾病常有家族遺傳傾向。研究中發現多種自身免疫性疾病的發生率與HLA的某些基因型檢出率呈正相關。大多數HLA系統與自身免疫性疾病的相關性表現在HLA-B或DR抗原上。

如公布號為CN103018436A，公布日為2013-4-3的一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽性血清的方法，其在經過免疫取血后，僅將血液分離出血清，對血清進行離心過濾就得到陽性血清。但是，該陽性血清存在使用效果不好的問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種使用效果優良的自身免疫性抗原(自免原)陽性血清的純化制備方法。

為解決以上技術問題，本發明采取如下技術方案：