[發明專利]人類病原真菌免疫熒光診斷試劑及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201410553206.7
• 申請日: 2014-10-17
• 公開（公告）號: CN104297484A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 李明春;陳家童;喻其林
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/544
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種人病原真菌感染免疫熒光診斷試劑，其特征在于：以引發淺層感染及系統性感染的臨床病原真菌為抗原，制備多克隆抗體或單克隆抗體，該抗體與粒徑0.1-10?nm的熒光納米量子點材料縮合形成熒光納米量子點-抗體復合物，既能直接用于檢測固定在載體材料上的未知抗原，又能將熒光納米量子點-抗體復合物包被在載體材料上，進而檢測未知抗原；所述熒光納米量子點材料激發光波長為200–700?nm。

2.根據權利要求1所述的人病原真菌感染免疫熒光診斷試劑，其特征在于：所述的載體材料為硝酸纖維素制備的膜材、片材或棒材；或PVC材料制備的24孔板或96孔板，或平皿，或反應碟。

3.如權利要求1所述的人病原真菌感染免疫熒光診斷試劑的制備方法，其特征包括：

第1、.制備抗體

第1.1、取臨床病原真菌感染患者病樣標本，分離病原真菌抗原標準株，確定其菌屬性；

第1.2、擴大病原真菌的培養，制備可溶性抗原；并以該抗原為致敏源，免疫動物，制備特異性多克隆抗體，或利用體外培養細胞融合技術制備特異性單克隆抗體；

第2、熒光納米量子點材料和抗體的酰胺脫水縮合

第2.1、.將粒徑0.1-?10?nm熒光納米量子點材料溶于無離子水，制成2?mg?/1ml濃度的熒光納米量子點溶液；

第2.2、.另將1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亞胺（EDC）與無離子水按1?g?/1ml濃度比的EDC溶液200?μl與上述第2.1步中的熒光納米量子點溶液200?μl混合，其中EDC:量子點材料?=?500:1，然后于4℃搖床反應15-20?分鐘，再加入0.5?mg?NHSS/1ml無離子水濃度的NHSS溶液200?μl反應30分鐘；

第2.3、.然后在上述反應體系中加入第1步制備、純化的1?mg/ml?抗體100-150?μl反應，置于4℃搖床過夜，即得到酰胺脫水縮合后的熒光納米量子點-抗體復合物溶液，并可直接用于對未知抗原的檢測或包被于載體材料。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述人病原真菌感染免疫熒光診斷試劑的制備方法適用于各類動物抗體與納米量子點材料的縮合反應。

5.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于：所述的熒光納米量子點材料是非金屬量子點熒光材料、金屬量子點熒光材料或貴金屬納米團簇熒光材料，熒光納米量子點的粒徑：0.1-?10?nm。

6.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于：所述熒光納米量子點材料是激發光波長為200nm?–?700?nm波長范圍內的自發熒光物質或人工合成的熒光物質。

7.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于：所述的熒光納米量子點材料的熒光發光色為藍色、綠色、黃色、橙色或紅色。