[發明專利]一種熱帶醋桿菌全細胞催化生產甘油酸的方法

有效

• 申請號: 201410552593.2
• 申請日: 2014-10-17
• 公開（公告）號: CN104312952B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 盧英華;蒲洋;陳慧敏;王寶貝;敬科舉;陳翠雪
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/42;C12R1/02
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙)35200
• 代理人: 馬應森

1.一種熱帶醋桿菌全細胞催化生產甘油酸的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)一級搖瓶種子培養：將甘油酸生產菌熱帶醋桿菌(Acetobacter tropicalis)CHM061701接種于裝有一級種子培養基的搖瓶中培養；所述熱帶醋桿菌(Acetobacter tropicalis)CHM061701已于2014年7月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，該保藏中心登記入冊編號為CGMCC NO.9417；

所述接種的接種量按質量百分比為一級種子培養基的0.1％～1％；所述一級種子培養基的組成為葡萄糖1～10g/L，酵母粉2～10g/L，蛋白胨2～10g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5～2g/L，滅菌前pH 6～7；

所述培養的條件于26～32℃，以150～250rpm培養16～28h；在步驟2)中，所述培養的條件于26～32℃，以150～250rpm培養16～28h；

2)二級搖瓶種子：將步驟1)的一級搖瓶種子培養的種子接種于裝有二級種子培養基的搖瓶中培養；

所述種子接種的接種量按質量百分比為二級種子培養基的1％～10％；所述二級種子培養基的組成為葡萄糖1～10g/L，酵母粉2～10g/L，蛋白胨2～10g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5～2g/L，滅菌前pH 6～7；

3)菌體富集培養：將步驟2)的二級搖瓶種子培養的種子接種于裝有菌體富集培養基的搖瓶中培養；

所述將步驟2)的二級搖瓶種子培養的種子接種于裝有菌體富集培養基的搖瓶中培養的條件為26～32℃，以150～250rpm培養48～72h；

所述種子接種的接種量按質量百分比為菌體富集培養基的1％～10％；所述菌體富集培養基的組成為甘油10～100g/L，酵母粉0.5～2g/L，蛋白胨0.5～2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5～2g/L，KH₂PO₃ 0.5～1.0g/L，K₂HPO₃ 0.08～0.15g/L，滅菌前pH 6～7；

4)菌體收集：取步驟3)培養所得菌液離心，洗滌，收集菌體，再加入甘油水溶液，調節初始pH為5～8；

所述菌液與甘油的質量比為(0.1～0.2)∶(2.25～4.5)，所述甘油水溶液的質量濃度為75～150g/L；

5)全細胞催化轉化：將步驟4)所得的含有菌體的甘油水溶液于搖瓶中進行催化轉化，得甘油酸。

2.如權利要求1所述一種熱帶醋桿菌全細胞催化生產甘油酸的方法，其特征在于在步驟4)中，所述離心的條件為8000～12000rpm離心5～10min；所述洗滌是洗滌2～3次。

3.如權利要求1所述一種熱帶醋桿菌全細胞催化生產甘油酸的方法，其特征在于在步驟5)中，所述催化轉化的條件為在溫度26～32℃下，以150～250rpm進行催化轉化24～48h。