[發(fā)明專利]一種靈芝菌固體發(fā)酵提取物的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410551930.6
• 申請日: 2014-10-17
• 公開（公告）號: CN104288187B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 康進;侯艷波;邵艷紅;陳金東;任楊帆
• 申請（專利權）人: 云南維和藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: A61K36/074
• 分類號: A61K36/074;A23L33/10
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發(fā)明屬于天然藥物制備領域，具體涉及一種靈芝菌固體發(fā)酵提取物的制備方法。

背景技術

靈芝(Ganoderma lucidum)，屬于擔子菌類多孔菌科赤芝或紫芝的干燥子實體，是一種大型真菌，有“仙草”、“瑞草”之稱。對人體具有雙向調(diào)節(jié)作用，所治病種，涉及心腦血管、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、呼吸、運動等各個系統(tǒng)，靈芝對神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，對循環(huán)系統(tǒng)有降壓和加強心臟收縮力的作用，對呼吸系統(tǒng)有祛痰作用。此外，還有護肝、提高免疫功能，抗菌等作用，尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠以及衰老的防治作用十分顯著。

靈芝多糖是靈芝的主要生物活性成分，靈芝多糖存在于天然靈芝子實體和菌絲體中，靈芝多糖具有抗腫瘤、抗氧自由基、抗衰老、提高免疫力、活血化瘀等生物活性。由于天然子實體生產(chǎn)周期長，受氣候影響大，產(chǎn)量及質(zhì)量不穩(wěn)定，且子實體木質(zhì)化程度高，多糖提取利用率較低。采用生物發(fā)酵技術產(chǎn)菌絲體，周期短、成本低、產(chǎn)量大，且具有工業(yè)化生產(chǎn)前景。

藥用植物與藥用真菌的共發(fā)酵，可綜合二者的優(yōu)勢，可能發(fā)現(xiàn)新的天然藥物和新的藥理活性物質(zhì)，開發(fā)共發(fā)酵技術是中藥和天然藥物創(chuàng)新的方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術的不足，提供一種靈芝菌固體發(fā)酵提取物的制備方法，該方法在制備過程中，培養(yǎng)小環(huán)境為裝有提取三七總皂苷后的三七殘渣、榨糖后的甘蔗渣等培養(yǎng)基質(zhì)的低壓聚乙烯袋。該方法生產(chǎn)周期短、有效成分含量高、管理容易，不需要特殊的化學試劑。

本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種靈芝菌固體發(fā)酵提取物的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1），靈芝菌種制備：將靈芝斜面菌種于一級菌種培養(yǎng)液中進行活化，生長4-5天，得到一級菌種；分離后將一級菌種轉(zhuǎn)入二級菌種培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，4-5天后得二級菌種；

步驟（2），固體培養(yǎng)基配制：按質(zhì)量比1.8-2.2:0.9-1.1:0.9-1.1:6稱取三七殘渣、甘蔗渣、米糠和純化水，充分拌勻后，將其裝入培養(yǎng)袋中，每袋重量為1.4-1.7kg，滅菌后備用，得到固體培養(yǎng)基；

步驟（3），接種發(fā)酵：將步驟（1）得到的二級菌種轉(zhuǎn)接至步驟（2）得到的固體培養(yǎng)基內(nèi)，接種量為10-30%，接種完畢扎袋時兩邊與外界相通以供氧；接種后將固體培養(yǎng)基置于溫度25-30℃，濕度60-75%的培養(yǎng)環(huán)境下進行暗培養(yǎng)；

步驟（4），培養(yǎng)終點確定：待固體培養(yǎng)基長滿靈芝菌絲體而未長子實體前即可結束培養(yǎng)；

步驟（5），共發(fā)酵提取物的制備：對長滿菌絲體的固體培養(yǎng)基進行提取，提取液經(jīng)濃縮、干燥，得共發(fā)酵產(chǎn)物，即靈芝菌固體發(fā)酵提取物，該靈芝菌固體發(fā)酵提取物中靈芝多糖含量≥50%，灰分含量≤10%。

上述技術方案步驟（1）中所述的斜面菌種為靈芝菌種接種于PDA培養(yǎng)基得到的，所述的PDA培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，pH值自然。

上述技術方案步驟（1）中所述的一級、二級菌種培養(yǎng)液均為包括按照重量份數(shù)計的如下組分：馬鈴薯200份，葡萄糖20份，蛋白胨2份，KH₂PO₄1份，MgSO₄0.6份，水1000份；pH自然。

上述技術方案步驟（2）中所述的固體培養(yǎng)基三七殘渣、甘蔗渣和米糠的質(zhì)量比為2：1：1。

上述技術方案，進一步優(yōu)選的是所述的三七殘渣為提取三七總皂苷后的三七殘渣，所述的甘蔗渣為榨糖后的甘蔗渣。

上述技術方案，步驟（2）中所述的培養(yǎng)袋為低壓聚乙烯袋。

上述技術方案步驟（3）中所述的扎袋的具體操作為將固體培養(yǎng)基的兩端用PTFE無菌封口透氣膜封口。

上述技術方案步驟（3）中所述的接種的具體操作是：滅菌備用的固體培養(yǎng)基和二級菌種液在無菌操作間內(nèi)進行接種，用長柄鑷子在固體培養(yǎng)基頂端均勻垂直打三個孔，每個孔接種15-20ml的菌種液，再用培養(yǎng)基蓋住接種的孔。

步驟（4）中所述的培養(yǎng)時間為15-25天。

上述技術方案步驟（5）中所述的提取方法為將長滿菌絲體的培養(yǎng)基用質(zhì)量倍數(shù)1.5-2.5倍量，濃度為85%乙醇回流提取2-3次，過濾，合并濾液得靈芝共發(fā)酵物乙醇提取液，濃縮至粘稠后，盛于烤盤中于70℃的鼓風干燥箱中干燥，得到干燥物A；濾渣用質(zhì)量倍數(shù)1.5-2.5倍量的純化水熱回流提取2-3次，過濾，合并濾液得靈芝共發(fā)酵物水提取液，濃縮，噴霧干燥，得到干燥物B；將干燥物A和干燥物B合并，即得靈芝菌固體發(fā)酵提取物。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其有益效果為：