[發(fā)明專利]一種鉆天柳莖段組培快繁的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410549842.2
• 申請日: 2014-10-16
• 公開（公告）號: CN104322369A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 季萍倩;孫振元;李振堅;韓蕾;劉俊祥;王正超
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，具體涉及一種鉆天柳莖段組培快繁的方法。

背景技術(shù)

鉆天柳(Chosenia?arbutifolia)又名朝鮮柳、紅梢柳，是楊柳科鉆天柳屬落葉大喬木，單屬單種。該種現(xiàn)已瀕臨滅絕，屬易危(V)級別的瀕危樹種，是國家Ⅱ級重點保護野生植物。鉆天柳主要分布于亞洲東北部,北起自北極圈,向南經(jīng)東西伯利亞,進人我國境內(nèi)。東西分布于俄羅斯東部及其島嶼、中國東北部、日本北部至中部和朝鮮的北部。由于生態(tài)環(huán)境惡化，有的地區(qū)已經(jīng)絕跡，有些地區(qū)僅有大樹而無幼苗與幼樹，其分布區(qū)正日益縮減。我國主要產(chǎn)自內(nèi)蒙古(大興安嶺西坡)、東北三省，生于海拔300m～900m的林區(qū)河流兩岸排水良好的碎石沙土上。

鉆天柳高可達20～30m，胸徑達0.5～1m，樹冠圓柱形，樹皮褐灰色，小枝無毛，黃色帶紅色或紫紅色，有白粉，葉長圓狀披針形至披針形，長5～8cm，寬1.5～2.3cm，先端漸尖，基部楔形，兩面無毛，上面灰綠色，下面蒼白色，常有白粉，邊緣稍有鋸齒或近全緣，花期5月，果期6月。鉆天柳樹干通直，樹姿高大挺拔，枝條秋季落葉后色彩鮮紅，是三北地區(qū)少有的冬季觀枝大喬木，秋季樹干高可達30m以上。木材紋理通直，顏色均一，可做建筑用材、家俱、造紙等用。鉆天柳喜陽光，耐寒性強，極耐水淹。鉆天柳根系發(fā)達，是地上部的3～5倍，是很好的防風(fēng)固沙和防洪樹種。由于生態(tài)環(huán)境惡化，有的地區(qū)已經(jīng)絕跡，有些地區(qū)僅有大樹而無幼苗與幼樹，其分布區(qū)正日益縮減。

鉆天柳人工繁殖十分困難，從60年代初開始，不斷有人進行繁殖試驗，比如扦插育苗、藥物刺激生根處理、組培育苗等，但一直未能擴大繁育和推廣，繁育難得問題一直未能得到徹底解決。目前采用種子繁殖，扦插枝條不易成活。

目前公開的鉆天柳的組織培養(yǎng)中，主要采用了MS、WPM進行了研究，2006年和2010年采用了MS為基本培養(yǎng)基，進行了誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基、增殖和愈傷的培養(yǎng)基采用MS，生根及生根繼代培養(yǎng)采用l/2MS，建立起鉆天柳(Chosenia?arbutifolia)離體繁殖技術(shù)。2013年發(fā)表的陶雙勇和張小單的文章采用WPM作為基本培養(yǎng)基進行了研究，誘導(dǎo)生根率較低。以上幾種配方的生長狀況一般，可操作性和重復(fù)性不高。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有鉆天柳組織培養(yǎng)方法中存在的生長狀況一般、可操作性和重復(fù)性不高問題，本發(fā)明旨在提供一種鉆天柳莖段組培快繁的方法。

本發(fā)明提供一種鉆天柳莖段組培快繁的方法，包括如下步驟：

采集鉆天柳當(dāng)年生莖段，依次進行1)外植體消毒、2)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、3)叢生芽增殖培養(yǎng)、4)叢生芽生根培養(yǎng)、5)煉苗移栽，得到鉆天柳組培苗。

所述采集鉆天柳當(dāng)年生莖段，為在春天采集鉆天柳當(dāng)年生枝條，要求枝條直徑3mm以上，將所采枝條截成3cm的莖段，要求每個莖段都長有一個腋芽。

所述1)外植體消毒，為將外植體以升汞溶液消毒，優(yōu)選為以質(zhì)量百分含量0.3％的升汞溶液消毒7min。

所述2)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，為將消毒后的莖段接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，使莖段先萌發(fā)新的叢生芽，后展開葉片。

所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以DKW培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有1.0mg/L(終濃度，下同)的6-BA(6-芐基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic?acid)的培養(yǎng)基，即DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基。

所述萌發(fā)新的叢生芽，時間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上20天后。

所述展開葉片，時間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上45天后。

所述3)叢生芽增殖培養(yǎng)，為將叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)所得叢生芽接種到脫分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至產(chǎn)生愈傷組織，將愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至產(chǎn)生不定芽。

所述脫分化培養(yǎng)基是以DKW培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基，即DKW+6-BA?2.0mg/L+NAA?0.1mg/L+瓊脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培養(yǎng)基。

所述產(chǎn)生愈傷組織，時間為接種到脫分化培養(yǎng)基上40天后。

所述分化培養(yǎng)基是以1/2NRM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.75mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基，即1/2NRM+6-BA?0.75mg/L+NAA?0.1mg/L+瓊脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培養(yǎng)基。