[發(fā)明專利]一種預(yù)測強直性脊柱炎易感性的檢測試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410548697.6
• 申請日: 2014-10-16
• 公開（公告）號: CN104313141A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊澤;張玉榮;趙承孝;劉銘;王建業(yè);孫亮;史曉紅;魏東;朱小泉;周林;張耀光;王娜娜;惠娟;趙帆;楊帆;張政;唐雷
• 申請（專利權(quán)）人: 衛(wèi)生部北京醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 李欣

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種預(yù)測強直性脊柱炎易感性的檢測試劑，更具體的說是通過測定與AS相關(guān)基因TNXB的多態(tài)性預(yù)測受試者對于強直性脊柱炎的易感性，該方法可用于疾病的輔助診斷、治療和新藥開發(fā)，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

強直性脊柱炎(Ankylosing?spondylitis，AS)是一種自身免疫性疾病，多發(fā)于16-40歲的青壯年，男女患病比例約為4～10:1。病變常首先發(fā)生于骶髂關(guān)節(jié)，少數(shù)重癥患者表現(xiàn)為整個脊柱強直。此外，部分患者伴有不同程度的髖關(guān)節(jié)、眼、肺、心血管、腎等脊柱外病變。AS在白種人群中的發(fā)病率約為1％～3％，我國AS患病率約為0.2-0.6％，其中60％以上的患者伴有髖關(guān)節(jié)受累，致使20％以上AS患者殘疾，炎癥主要累及關(guān)節(jié)囊、肌腱和韌帶的骨附著點，導(dǎo)致局部關(guān)節(jié)粘連強直，活動受限。臨床上至今尚缺乏可明顯緩解和控制疾病發(fā)展的藥物。AS屬多基因疾病，具有明顯的遺傳傾向，雖然通常認為遺傳與免疫因素在AS發(fā)病中起主導(dǎo)作用，但確切的病因與發(fā)病機制仍不清楚。

目前進行AS遺傳病因研究，多采用SNP作為基因組標志的關(guān)聯(lián)分析方法，是有效的，已得到證明。SNP是指染色體基因組水平上單個核苷酸變異引起的DNA序列多態(tài)性，在人群中的頻率需>1％，SNPs是雙等位基因標記，這種單堿基變化中有70.1％為同型堿基之間的轉(zhuǎn)換：如G/A或T/C，29.1％為發(fā)生在嘌呤和嘧啶之間的顛換。C(胞嘧啶)是人類基因組中最易發(fā)生變化的位點，因為大多數(shù)是甲基化胞嘧啶，能夠自發(fā)脫氨基轉(zhuǎn)換為T(胸腺嘧啶)，SNP包含了已知多態(tài)性的80-90％，是最常見的遺傳變異。

由于生存的選擇壓力導(dǎo)致SNP在單一基因和整個基因組中的分布呈不均勻性。SNPs在基因非編碼區(qū)的數(shù)量是編碼區(qū)的4倍，總數(shù)可達3百萬個。SNP以其密度高(平均每1kb就有1個)、代表性強(位于基因內(nèi)部的SNP可能直接影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或表達水平)、遺傳穩(wěn)定性好(同微衛(wèi)星多態(tài)性比較而言)、易于自動化分析(因SNP在人群中多為雙等位基因標記，可簡單以“+/－或1/0”直接分型)等特點成為很好的遺傳標志。

1973年，Brewerton等首先發(fā)現(xiàn)了與AS強相關(guān)的人類白細胞抗原-B27(HLA-B27)。隨著研究的進展，與AS相關(guān)的其他易感基因如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)陸續(xù)被識別。

TNXB(tenascin?XB，細胞粘合素XB)基因位于6q21.3，全長68220bp。該基因定位于人類白細胞抗原III區(qū)域，與免疫反應(yīng)及自身性免疫疾病發(fā)生發(fā)展等密切相關(guān)。

TNXB基因與AS相關(guān)聯(lián)的研究近些年尚無報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種預(yù)測強直性脊柱炎易感性的試劑盒，包括PCR引物和含有該引物的試劑盒。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種檢測強直性脊柱炎易感性基因的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種檢測強直性脊柱炎易感性的核酸序列，具有序列表SEQ?ID?No.1所示的堿基序列，其32038541位置即是變異位點，以字母“R”標示出。該核酸序列為TNXB基因部分序列。圖1為TNXB基因結(jié)構(gòu)及其多態(tài)性變異位點的示意圖，附圖中包含有多個外顯子，32038541標在TNXB基因內(nèi)含子區(qū)的相應(yīng)位置。

一種檢測強直性脊柱炎易感性的方法，通過提取宿主細胞的基因組DNA，測定受試者的TNXB基因內(nèi)含子區(qū)32038541位置多態(tài)性位點的基因型，預(yù)測受試者對強直性脊柱炎的易感性：TNXB基因內(nèi)含子區(qū)32038541位置的基因型為GG時，受試者的易感性最低；攜帶A等位基因時，受試者的易感性升高。

一組檢測強直性脊柱炎易感性的引物，引物的核苷酸序列分別為序列表SEQ?ID?No.2和序列表SEQ?ID?No.3所示，長度分別為25bp和25bp，而且可以特異性地擴增出包含有SEQ?ID?No.1所示序列中32038541位置的產(chǎn)物。

本發(fā)明提供了一種檢測強直性脊柱炎易感性的診斷試劑盒，其中含有本發(fā)明特異性擴增TNXB基因內(nèi)含子區(qū)32038541位置的引物對和用于PCR擴增檢測的試劑盒的常規(guī)組件、試劑、緩沖液等，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知這些常規(guī)組件和檢測方法。本發(fā)明試劑盒中的全部組分、含量、來源和使用方法如下：

一種檢測強直性脊柱炎易感基因的試劑盒，由以下試劑組成：

(1)10μL?10×PCR緩沖液；

(2)2μL?10mMdNTP混合液；