[發明專利]具有蛋白增色增敏效應的硫醇衍生化納米金材料的制備

有效

• 申請號: 201410547148.7
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN104226984A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 曾紅娟;趙然琳;劉貽堯
• 申請（專利權）人: 電子科技大學
• 主分類號: B22F1/00
• 分類號: B22F1/00;B22F9/24;B82Y40/00;G01N21/64;G01N21/31;G01N21/35
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技術領域

本發明屬材料科學領域，具體涉及一種具有蛋白增色增敏效應硫醇衍生化納米金材料的制備方法和檢測結果。?

背景技術

納米金作為一種特性優良的納米材已在在藥物靶向傳輸體系、疾病檢測、分子識別、生物標簽等領域有著廣泛的應用，其中納米金粒子的大小是影響其應用一個重要的因素，直徑越小納米金粒子的研究已經成為研究的熱點。但是，由于納米金由于其表面效應，隨著納米金粒子直徑的減小，其表面原子數所占數量的比例逐漸增加，表面原子的巨大剩余成鍵能力使得納米金粒子較容易團聚、沉聚，使得納米金粒子很不穩定，因而影響在需要更高檢測靈敏度生物檢測領域中應用。本發明提供了一種硫醇衍生化納米金材料的制備和蛋白增色增敏效應檢測方法，通過蛋白增色增敏效應檢測發現新制備的材料可以滿足需要更高檢測靈敏度的生物檢測領域的要求。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種硫醇衍生化納米金材料的制備和蛋白增色增敏效應檢測方法，其具體的硫醇衍生化納米金材料的制備步驟如下：?

1)制備納米金；采用檸檬酸三鈉還原法制備納米金。取氯金酸水溶液，加熱至沸騰攪動下準確加入質量分數為1％的檸檬酸三鈉，繼續煮沸，直至溶液顏色由橙黃色變為酒紅色停止加熱。自然冷卻至室溫并以蒸餾水恢復到原來的體積,置于4℃冰箱保存備用。?

2)制備硫醇衍生化納米金粗液；取納米金溶液，向其中加入一定濃度的乙二硫醇的四氫呋喃溶液，攪拌溶液過夜后離心過濾去除溶液中游離的配體分子，既得硫醇衍生化納米金粗液。?

3)將硫醇衍生化納米金粗液進一步分散于雙蒸水中，在超聲波清洗器中進行清洗的即制得硫醇衍生化納米金，所制備的納米金結構如圖1所示。?

具體的蛋白增色增敏效應檢測方法?

在一定濃度的蛋白溶液中加入相同體積的硫醇衍生化納米金和納米金溶液，分別采用紫外?-可見光分光光度儀、熒光分光光度儀以傅里葉變換紅外光譜儀對它們的混合樣品進行檢測，紫外-可見光分光光度儀、熒光分光光度儀以傅里葉變換紅外光譜儀檢測結果分別如圖2，圖3和圖4所示。?

附圖說明：

圖1?納米金結構示意圖?

圖2?CEA與納米金及CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的紫外-可見光圖；其中曲線1:CEA蛋白與納米金相互作用的紫外-可見吸收曲線，曲線2：CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的紫外-可見吸收曲線?

圖3?CEA與納米金及CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的熒光發射譜圖；其中曲線1:CEA蛋白與納米金相互作用的熒光發射曲線，曲線2：CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的熒光發射曲線?

圖4?CEA與納米金及CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的紅外光譜圖；其中曲線1:CEA蛋白與納米金相互作用的紅外透射曲線，曲線2：CEA與硫醇衍生化納米金相互作用的紅外透射曲線?

具體實施方式

硫醇衍生化納米金材料制備的具體實施方案?

1)制備納米金的具體過程為，在一清潔的200ml的燒杯中用一清潔的量筒量取100ml質量分數為0.01％的氯金酸水溶液，在加熱攪動至沸騰后，用另一個容量為5ml的清潔量筒量取2ml質量分數為1％的檸檬酸三鈉加入氯金酸溶液中，繼續煮沸和攪拌15min，直至溶液顏色由橙黃色變為酒紅色停止加熱，在磁力攪拌下自然冷卻，再加入蒸餾水恢復到原來的體積，置于4℃冰箱保存備用。?

2)取一個容量為10ml的清潔量筒量取10ml納米金溶液加入容量為50ml的潔凈燒杯中，向其中加入10ml濃度為1mmol/L的乙二硫醇的四氫呋喃溶液，放在磁力攪拌器上攪拌溶液過夜。?

3)將過夜后的溶液緩慢轉移到漏斗中過濾，并用雙蒸水清洗三次。?

4)用20ml雙蒸水將濾紙上的留下的物質沖洗到一個潔凈的燒杯中，制得硫醇衍生化納米金?粗液。?

5)將制得硫醇衍生化納米金粗液放在超聲波儀中進一步分散，得到硫醇衍生化納米金分散液。?

蛋白增色增敏效應檢測方法的具體實施方案?

1)配制濃度為80ng/ml的癌胚抗原蛋白溶液。?

2)在U-2910型(HITACHI，High-Technologies?Corporation)紫外-可見光分光光度儀的比色皿中加入2ml癌胚抗原蛋白溶液，然后分別加入1ml的納米金和硫醇衍生化納米金溶液，采用光譜掃描的方法，檢測它們在200nm-800nm波長范圍內的吸光度曲線并進行分析比較。?