[發明專利]一種分離可代謝粗榧生物堿菌株的方法

在審

• 申請號: 201410543328.8
• 申請日: 2014-10-15
• 公開（公告）號: CN104357325A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 王祖華;王安亭;李永程;楊瑞先;黃向東;王佳偉
• 申請（專利權）人: 洛陽理工學院
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 苗強

1.一種分離可代謝粗榧生物堿菌株的方法，選取多年生粗榧的根、莖、葉作為外植體，經切條、滅菌后放入培養基中培養使其長出粗榧共生菌，然后對粗榧共生菌按照菌種不同進行分離并分別培養發酵，將發酵液濃縮后進行檢測以確定其是否為可代謝粗榧生物堿菌株，其特征在于：所述培養發酵的具體操作方法為將粗榧共生菌活化后放入溫度為26℃的環境中培養48h，根據不同菌種的菌落特征鑒定出各菌種，再將各菌種分別接種到裝有PDA培養基的培養皿上培養，待菌種產生代謝生物1-2天后接入第二批菌種，以促進第二批菌種的生長，第二批接種的菌種長出后接種到裝有發酵培養基的搖瓶內，然后把搖瓶放入轉速為200r/min、溫度為28⁰C的搖床上培養5d，收集各菌種的發酵液即可；

所述發酵液濃縮的具體操作方法為將各菌種的發酵液分別放入轉速為10000r/min的冷凍高速離心機中離心，收集上清液，把上清液放入轉速為10000r/min的冷凍高速離心機中再次離心，然后把再次離心后的上清液放入溫度為40-50℃、壓強為0.05Mpa的旋轉蒸發儀中濃縮至原體積的十分之一，再將各菌種的濃縮液分別放入溫度為4℃的冰箱內即可。

2.根據權利要求1所述的一種分離可代謝粗榧生物堿菌株的方法，其特征在于：所述搖瓶內發酵培養基由土豆汁、葡萄糖、蛋白胨、可溶性淀粉、MgSO₄、KH₂PO₄和水制成，且各組分的質量百分比為土豆汁2%，葡萄糖2%，蛋白胨0.12%，可溶性淀粉1%，?MgSO_4?0.05%，?KH₂PO₄?0.15%，余量為水，培養基的pH=7；

所述土豆汁由組分A和組分B按照10:1的重量比混合后放入旋轉蒸發儀中濃縮至原體積的三分之一后制得，所述組分A是將土豆切碎后放入溫度為95-100℃的鍋中蒸煮20-30min，取出后過100-200目篩，收集濾液制得；所述組分B是將土豆切碎后放入榨汁機中壓榨，再把榨汁過80-100目篩，收集濾液制得。