[發明專利]一種利用青藏高原高寒草甸原生態條件制備冬蟲夏草菌種材料的方法

有效

• 申請號: 201410541676.1
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN104365320B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發明（設計）人: 鐘欣;劉昕;張古忍;李少松;闞緒甜;何健敏;張劍霜
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01G1/04;A01G1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種利用青藏高原高寒草甸原有生態條件制備冬蟲夏草菌種材料的方法。

背景技術

冬蟲夏草Ophiocordyceps?sinensis(Berk.)Sung，Sung，Hywel-Jones&Spatafora是一種蟲生子囊真菌，寄生于鱗翅目Lepidoptera蝠蛾科Hepialidae鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的幼蟲，其無性型為中國被毛孢Hirsutella?sinensis?Liu，Guo，Yu&Zeng。冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的一個世代包括卵、幼蟲、蛹和成蟲四個發育階段，幼蟲營地下隧道式穴居生活，雜食性，喜食圓穗蓼、頭花蓼、小大黃和珠芽蓼等高寒植物的幼嫩根莖。

冬蟲夏草分布于青藏高原高海拔區域，該區域高寒缺氧，其氣溫常年具有高山低溫的特點。利用青藏高原高寒草甸原有生態環境條件進行原生態冬蟲夏草道地藥材產業化研究，可有效保持冬蟲夏草道地產區的原生態屬性，同時也可以最大程度節省能源消耗，達到清潔生產的目的。

目前采用常規冬蟲夏草菌種侵染寄主鉤蝠蛾昆蟲幼蟲仍存在侵染率低、耗費時間長等問題。中國發明專利申請(公開號：CN102696555A)公開了一種半野生人工培殖冬蟲夏草的方法，中國發明專利申請(公開號：CN102405763A)公開了一種冬蟲夏草的培育方法，上述2個專利申請均采用含有中國被毛孢的菌液連續噴灑寄主幼蟲體表的方法進行接種侵染；中國發明專利申請(公開號：CN102696392A)公開了天然冬蟲夏草的增產方法，其中采用誘集液誘集蝙蝠蛾幼蟲后，向幼蟲噴灑蝙蝠蛾被毛孢和蝙蝠蛾擬青霉兩種菌種液體種；中國發明專利申請(公開號：CN102106235A)公開了一種全人工培養冬蟲夏草的方法，其中采用一端直徑小于0.2mm的不銹鋼實心針或空心針的針狀器具，沾取中國被毛孢菌體和孢子混懸液刺傷寄主幼蟲的方法進行接種侵染；中國發明專利申請(公開號：CN102792855A)公開了一種用于冬蟲夏草寄主感染的菌種材料及寄主感染方法，采用冬蟲夏草菌皮作為菌種材料灌注、或拌入飼料喂食、或注射、或噴淋侵染寄主幼蟲。但上述方法存在侵染活性低、或損傷后存活率低、或耗費時間過長、或菌種材料產量有限等問題，是制約原生態冬蟲夏草道地藥材產業化的關鍵問題之一。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用高寒草甸原有生態條件制備具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料的方法。該方法利用青藏高原高寒草甸原有植被及生態條件，通過構建冬蟲夏草菌中國被毛孢與活體高寒植物組織的共生體，增大高寒植物組織中國被毛孢的共生量，激活中國被毛孢的侵染活性，得到對寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料，達到高效侵染寄主鉤蝠蛾幼蟲的目的。

發明人研究發現，冬蟲夏草菌的無性階段中國被毛孢在自然界中與其適生地中的多種高寒植物的根、莖、葉等組織存在共生現象。進一步的研究發現，經高寒植物組織根、莖、葉等組織共生，共生后要比未共生的冬蟲夏草菌的侵染活性高數十至數百倍，基于這一原理發明本方法。

本發明制備具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料的方法包括：在青藏高原冬蟲夏草適生的高寒草甸原有植被及生態環境下，建立高寒植物苗培育園，利用原生態溫濕度及光照條件，通過適合高原的農業園藝栽培技術進行水肥管理，栽培并獲得冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲取食的高寒植物苗；將冬蟲夏草菌源接種到培育園栽培的高寒植物苗組織上，根據不同海拔的氣候規律情況，利用每年5～11月原生態溫濕度條件，遮陰營造適宜的條件，使冬蟲夏草菌的無性階段中國被毛孢與活體高寒植物共生培育形成菌物-植物共生體，將菌絲檢測結果為中國被毛孢的菌物-植物共生體作為對寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料。

本發明的具體步驟包括：

1.在海拔2500～5200米的青藏高原冬蟲夏草適生地區域的高寒草甸，利用其原有高寒植被植株，以10～20m×10～20m大小為建設單位，建立冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲食料植物的高寒植物苗培育園；采用通常農業園藝規劃方法進行分區建壟，壟面大小為50～90cm×450～1920cm，在壟面中間上方高30～100cm處鋪設水肥管理管路，壟間設立寬20～30cm深5～10cm的區域便于排水和管理人員行走，培育園四周留下約35～50cm的空區；