[發(fā)明專利]一種具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料的制備及侵染鉤蝠蛾幼蟲的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410541471.3
• 申請(qǐng)日: 2014-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN104381011B
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘欣;劉昕;何健敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04;A01H17/00;A01K67/033;A23K50/90;A23K10/16
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種冬蟲夏草菌種材料的制備及其用于侵染鉤蝠蛾幼蟲的方法

背景技術(shù)

冬蟲夏草Ophiocordyceps sinensis(Berk.)Sung，Sung，Hywel-Jones&Spatafora是一種蟲生子囊真菌，寄生于鱗翅目Lepidoptera鉤蝠蛾科Hepialidae鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的幼蟲，其無(wú)性型為中國(guó)被毛孢Hirsutella sinensis Liu，Guo，Yu&Zeng。冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的一個(gè)世代包括卵、幼蟲、蛹和成蟲四個(gè)發(fā)育階段，幼蟲營(yíng)地下隧道式穴居生活，雜食性，喜食圓穗蓼、頭花蓼、小大黃和珠芽蓼等高寒植物的幼嫩根莖，飼養(yǎng)時(shí)也可用胡蘿卜等常見肉質(zhì)地下莖植物作為替代食料。

冬蟲夏草分布于青藏高原高海拔區(qū)域，其生長(zhǎng)范圍局限，產(chǎn)量也極為有限。它是青藏高原特色名貴滋補(bǔ)中藥材，具有重要的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于冬蟲夏草的形成過(guò)程中仍有許多關(guān)鍵問(wèn)題尚不清楚，中國(guó)被毛孢侵染鉤蝠蛾昆蟲的侵染活性較弱，原生態(tài)冬蟲夏草道地藥材的產(chǎn)業(yè)化迄今仍存在許多障礙難題。

目前采用中國(guó)被毛孢侵染寄主鉤蝠蛾昆蟲幼蟲仍存在侵染率低、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)：CN102696555A)公開了一種半野生人工培殖冬蟲夏草的方法，中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)：CN102405763A)公開了一種冬蟲夏草的培育方法，中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(授權(quán)號(hào)：CN100587057C)公開了一種冬蟲夏草的生產(chǎn)方法，中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(授權(quán)號(hào)：CN100434508C)公開了一種提高青藏高原冬蟲夏草產(chǎn)量的方法，上述4個(gè)專利申請(qǐng)均直接采用含有中國(guó)被毛孢的菌液或子囊孢子液向寄主幼蟲體表噴灑的方法進(jìn)行接種侵染；中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)：CN102696392A)公開了天然冬蟲夏草的增產(chǎn)方法，其中采用誘集液誘集蝙鉤蝠蛾幼蟲后，向幼蟲噴灑蝙鉤蝠蛾被毛孢和蝙鉤蝠蛾擬青霉兩種菌種液體種；中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)：CN102106235A)公開了一種全人工培養(yǎng)冬蟲夏草的方法，其中采用一端直徑小于0.2mm的不銹鋼實(shí)心針或空心針的針狀器具，沾取中國(guó)被毛孢菌體和孢子混懸液刺傷寄主幼蟲的方法進(jìn)行接種侵染；中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)：CN102792855A)公開了一種用于冬蟲夏草寄主感染的菌種材料及寄主感染方法，采用冬蟲夏草菌皮作為菌種材料灌注、或拌入飼料喂食、或注射、或噴淋侵染寄主幼蟲。但上述方法存在侵染活性低、或損傷后存活率低、或耗費(fèi)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、或菌種材料產(chǎn)量有限等問(wèn)題，是制約原生態(tài)冬蟲夏草道地藥材產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵問(wèn)題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料的制備方法，以及該冬蟲夏草菌種材料用于侵染鉤蝠蛾幼蟲的方法。

發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草菌的無(wú)性階段中國(guó)被毛孢在自然界中與其適生地中的多種高寒植物的根、莖、葉等組織存在共生現(xiàn)象。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)高寒植物組織根、莖、葉等組織共生，共生后要比未共生的冬蟲夏草菌的侵染活性高數(shù)十至數(shù)百倍，基于這一原理發(fā)明本方法。該方法利用冬蟲夏草菌無(wú)性階段中國(guó)被毛孢與植物組織形成共生體生活史的原理，采用冬蟲夏草菌源與植物共生培育的方法，激活冬蟲夏草菌對(duì)其寄主鉤蝠蛾幼蟲的侵染活性，從而獲得具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料。

本發(fā)明的具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料的制備方法是：首先將冬蟲夏草菌源接種到植物組織上，通過(guò)冬蟲夏草菌源與植物共生培育的方法，使冬蟲夏草菌無(wú)性菌絲中國(guó)被毛孢與共培育的植物組織相互作用發(fā)生共生關(guān)系，形成菌物-植物共生體，將菌絲檢測(cè)結(jié)果為中國(guó)被毛孢的菌物-植物共生體作為對(duì)寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種材料。

本發(fā)明所采用的冬蟲夏草菌源可以是通過(guò)常規(guī)分離、純化、固液相發(fā)酵獲得的中國(guó)被毛孢Hirsutella sinensis的發(fā)酵物，配制成發(fā)酵物與水質(zhì)量比為1∶100～1∶1000的懸浮液作為冬蟲夏草菌源；或者是將收集的冬蟲夏草新鮮子囊孢子，用滅菌的生理鹽水配制成每毫升含有100～1000個(gè)子囊孢子的懸浮液作為冬蟲夏草菌源。