[發(fā)明專利]一種鹿茸草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410540536.2
• 申請(qǐng)日: 2014-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN104221878A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鹿茸草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快繁方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鹿茸草，Monochasma?sheareri?Maxim.ex?Franch.?et?Savat.，玄參科，別名：千年艾，千重塔，瓶兒蜈蚣草等，多年生草本植物，主根木質(zhì)化，莖多數(shù)，密集叢生，全體多少呈綠色，下部被少量綿毛，節(jié)間極短，有短柔毛或無毛，葉交互對(duì)生，有時(shí)互生，莖下部葉鱗片狀，因節(jié)間短而互相蓋迭呈覆瓦狀，向上漸大，條形或條狀披針形，花單生于莖上部葉腋，呈總狀花序，子房長卵形，花柱頂端彎曲，柱頭頭狀，蒴果卵形，為宿萼所包被，室背開裂，種子多數(shù)，扁橢圓形，分布于山東、江蘇、安徽、浙江、江西、湖北等地，生于低山多沙山地及草叢中。全草：苦，涼。清熱解毒，涼血止血，用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。目前鹿茸草尚未見人工繁殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是鹿茸草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明方法所制備的鹿茸草懸浮培養(yǎng)增長率高，生長穩(wěn)定，為藥用資源的開發(fā)利用提供了更直接的途徑。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案：

取鹿茸草葉片，擦拭干凈，在洗衣粉中浸泡4min，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0.1%氯化汞處理6min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加5.5g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度26℃，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基VR+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.2-0.3mg/L+L-谷氨酰胺6-8mmol/L+草酸鈉50-100mg/L中進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照時(shí)間14h/d，溫度26℃。

采用本發(fā)明制備的鹿茸草細(xì)胞增殖率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

取鹿茸草葉片，擦拭干凈，在洗衣粉中浸泡4min，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0.1%氯化汞處理6min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加5.5g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度26℃，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基VR+ZT0.3mg/L+KT0.2mg/L+L-谷氨酰胺6mmol/L+草酸鈉50mg/L中進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照時(shí)間14h/d，溫度26℃，懸浮細(xì)胞增長率56%。

實(shí)施例2

取鹿茸草葉片，擦拭干凈，在洗衣粉中浸泡4min，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0.1%氯化汞處理6min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加5.5g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度26℃，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基VR+ZT0.5mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺8mmol/L+草酸鈉100mg/L中進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照時(shí)間14h/d，溫度26℃，懸浮細(xì)胞增長率57%。

實(shí)施例3

取鹿茸草葉片，擦拭干凈，在洗衣粉中浸泡4min，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0.1%氯化汞處理6min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入VR+NAA0.01mg/L+ZT3mg/L+1mg/L制霉菌素培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加5.5g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度26℃，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基VR+ZT0.4mg/L+KT0.3mg/L+L-谷氨酰胺7mmol/L+草酸鈉100mg/L中進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，光照5500lx，光照時(shí)間14h/d，溫度26℃，懸浮細(xì)胞增長率58%。