[發明專利]快速高效獲得無菌哺乳動物的方法

有效

• 申請號: 201410539348.8
• 申請日: 2014-10-13
• 公開（公告）號: CN105557621B
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 劉麗均;徐平;郁麗麗;李淼;張藝寶;強蘇靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院;上海斯萊克實驗動物有限責任公司
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;陸鳳

本發明提供一種快速高效獲得無菌哺乳動物的方法，包括：a).獲得雄性哺乳動物的精子并使所得精子獲能；b).獲得雌性哺乳動物的卵子；c).利用步驟a)獲得的精子與步驟b)獲得的卵子制備受精卵；d).獲得無精雄性哺乳動物；e).制備假孕雌性哺乳動物；f).利用步驟c)獲得的受精卵制備胚胎；g).獲得含有步驟f)所得胚胎的假孕雌性哺乳動物；和h).無菌培養步驟g)獲得的雌性哺乳動物，得到無菌哺乳動物。該方法具備時間短、見效快、效率高、飼養群體小的優點，從而能快速高效地提供無菌哺乳動物用于各種用途。

技術領域

本發明涉及實驗動物科學領域。具體地說，本發明涉及一種快速高效獲得無菌哺乳動物的方法以及所獲得的無菌哺乳動物的用途。

背景技術

隨著醫學和生物學的迅猛發展，作為生命科學支撐條件的實驗動物學也得到了前所未有的重視，不但實驗動物學研究內容進一步拓展、加深；而且對于高級別的實驗動物的需求也越來越多，要求越來越嚴格。從普通級別實驗動物的被取消，到清潔級動物，無特定病原體動物(Specific pathogen-free animal,SPF)的大量需求，再到無菌動物包括各種已知微生物的實驗動物(悉生動物)，為生命科學的研究的精細化、數量化、穩定可重復性提供了支撐。

然而，各種高級別的實驗動物必須飼養在特定的SPF屏障系統中，而無菌動物飼養的條件更加嚴格，稍有不慎很容易感染細菌病毒，即使是非致病菌，也造成了微生物等級的下滑。低級別的實驗動物必須通過環境消毒配合生物凈化的手段來重新獲得高級別實驗動物。

傳統的生物凈化為剖腹取胎，即將待凈化的動物交配懷孕，等到接近臨盆的時候，剖腹，連同子宮和胎兒通過凈化藥液進入隔離手術操作器內，剖開子宮取出胎兒，待胎兒能自由呼吸后傳送給帶奶母鼠，哺乳到斷奶。這種傳統的剖腹取胎的方式的缺點在于：1、當發生大規模污染時，不能盡快的恢復較大的種群，需要時間間隔較長；2、剖腹取胎容易造成剖腹過程中仔鼠死亡，主要由于仔鼠肺部不能及時張開自主呼吸；3、剖腹取胎的仔鼠容易被帶奶母鼠吃仔，因為帶奶母鼠天然的母性，會將不是自己所生的仔鼠咬死，甚至吃仔。

現有技術中雖然也有一些其它替代方法，但對于最高級別的實驗動物-無菌動物而言，這些方法依然存在存活率低(不足50％)、凈化所需要時間周期長(60天左右)、種群大(制備代乳母鼠的雌鼠及與之交配的雄鼠；需要生物凈化的雌鼠及與之交配的雄鼠)等缺陷。

因此，本領域急需一種快速、高效、簡便而且成功率高的無菌哺乳動物制備方法，從而能夠用于生物學或醫學研究工作。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、高效、簡便而且成功率高地制備無菌哺乳動物的制備方法，以及采用本發明方法制備得到無菌哺乳動物作為標準實驗動物的用途。

在第一方面，本發明提供一種無菌哺乳動物的制備方法，所述方法包括以下步驟：

a).獲得雄性哺乳動物的精子并使所得精子獲能；

b).獲得雌性哺乳動物的卵子；

c).利用步驟a)獲得的精子與步驟b)獲得的卵子制備受精卵；

d).獲得無精雄性哺乳動物；

e).制備假孕雌性哺乳動物；

f).利用步驟c)獲得的受精卵制備胚胎；

g).獲得含有步驟f)所得胚胎的假孕雌性哺乳動物；和

h).無菌培養步驟g)獲得的雌性哺乳動物，得到無菌哺乳動物。

在優選的實施方式中，步驟d)、e)和f)在36℃-37℃的溫度以及45％-70％的濕度下進行。

在優選的實施方式中，步驟d)、e)和f)在36.5℃-37℃的溫度以及50％-60％的濕度下進行。