[發明專利]一種細胞法生產手性烯醇的方法

在審

• 申請號: 201410537233.5
• 申請日: 2014-10-13
• 公開（公告）號: CN104328153A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 劉均洪;高鑫
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: C12P17/04
• 分類號: C12P17/04;C12R1/72
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種挪威假絲酵母細胞生物催化制備(2S,3R)-1,2-（亞環己基二氧基）庚-6-烯-3-醇的方法，其特征在于反應罐中加入磷酸鹽緩沖液，裝料系數為0.6-0.7，pH為6.5，加入吸附了底物R-亞環己基甘油醛與4-溴-1-丁烯的苧麻紗布，使底物R-亞環己基甘油醛添加量為80-90?g/L，底物R-亞環己基甘油醛與底物4-溴-1-丁烯摩爾比為1，葡萄糖含量為?20-25g/L，木糖13-15?g/L，山梨坦單月桂酸酯含量為19-20g/L，121℃高壓滅菌30分鐘；冷卻至27-28℃時，加入濕酵母細胞使濃度為22-26g/L，通氣比為0.15-0.18V/（V分鐘），進行生物催化反應，反應時間為86-92小時；反應結束后，分別濾出細胞、苧麻紗布，用乙酸乙酯萃取反應液、萃取苧麻紗布，合并乙酸乙酯萃取液和萃取苧麻紗布的乙酸乙酯，蒸出乙酸乙酯，得到產物(2S,3R)-1,2-（亞環己基二氧基）庚-6-烯-3-醇，反應轉化率94-96％，產品收率92-94％，對映體過量率（ee%）97-98％。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于濕酵母細胞制備過程如下：挪威假絲酵母經斜面、搖瓶、種子罐培養得到種子液；發酵罐加入培養液，裝料系數為0.6-0.7，121℃高壓滅菌30分鐘，冷卻至30-31℃，將挪威假絲酵母種子液接種至發酵罐，接種比例為8-10％，通氣比為0.5-0.8V/（V分鐘），30-31℃培養30-36小時，用過濾式離心機離心得到濕酵母細胞，用作生物催化反應催化劑。

3.?權利要求1所述的方法，其特征在于種子培養基成份為:?酵母提取物10?g/L，葡萄糖20?g/L，蛋白胨20?g/L，pH自然;?配制固體培養基時添加15g/L的瓊脂粉；

培養液成份為：葡萄糖25-30?g/L，甘油25-30?g/L，玉米胚芽粉30-40?g/L，?KH₂PO₄?9-11?g/L，MgSO₄.7H₂O?0.3-0.4?g/L，pH值為6.0。

4.?權利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附了底物的苧麻紗布制作方法為，將底物R-亞環己基甘油醛和4-溴-1-丁烯混溶，R-亞環己基甘油醛與4-溴-1-丁烯摩爾比為1，用尺寸為0.5cmX0.5cm的苧麻紗布吸收此溶液，即得到吸附了底物的苧麻紗布，調節底物與苧麻紗布用量，使得底物與苧麻紗布的質量比率為0.36-0.38。