[發明專利]一種快速定量蜂蜜品質的高效液相色譜方法

在審

• 申請號: 201410535926.0
• 申請日: 2014-10-11
• 公開（公告）號: CN105572237A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 韓雪
• 申請（專利權）人: 天津中發蜂業科技發展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種定量蜂蜜品質的色譜方法，尤其涉及一種快速定量蜂蜜品質 的高效液相色譜方法。

背景技術

蜂蜜中含有超過180種活性物質，其主要成分為果糖和葡萄糖及4％～5％ 的低聚果糖，另外蜂蜜中還含有豐富的氨基酸、維生素、活性酶、類黃酮、多酚 類、類胡蘿卜素等活性物質及多種礦物質。蜂蜜具有抗氧化、抗菌、加速創傷修 復、增強免疫力等多種生理活性，因而蜂蜜不但被作為一種直接有效的營養補充 來源，而且被應用于治療肝炎、癌癥、傷口感染、便秘以及改善胃腸功能、提高 機體免疫力等。

近年來，蜂蜜作為一種藥食兩用的天然保健品，受到越來越多的青睞。我國 是養蜂及蜂蜜出口大國，20世紀90年代我國蜂蜜出口量占世界年貿易量的4 0％。然而，蜂蜜是一種極易摻假的食品，近年來由于摻假等質量問題，使我國 蜂蜜產品的信譽越來越低，出口量逐年下降。為了規范蜂蜜市場，國家標準化委 員會于2005年10月26日發布了GB18796—2005《蜂蜜》國家強制性標準， 并規定自2006年3月1日起實施。GB18796—2005規定蜂蜜中果糖和葡萄 糖含量應大于等于60％，而歐盟、日本等蜂蜜進口國還規定了蜂蜜中還原糖含量 及果葡比等參數。因此，必須建立一系列蜂蜜中還原糖的測定方法，既可以保護 消費者利益，又對蜂蜜生產企業的生產具有指導意義。

目前，關于蜂蜜中還原糖測定的方法主要有滴定法、旋光法、薄層色譜、高 效液相色譜法、離子色譜脈沖安培法、氣質聯用法、高效毛細管電泳法、核磁共 振法等。但是傳統的滴定法、薄層色譜法、旋光度法操作繁瑣而且準確度不高。 高效液相色譜法采用示差折光檢測器或蒸發光散射檢測器，靈敏度較低，且受溫 度、流動相影響大。離子色譜脈沖安培法用于單糖、二糖、小分子寡糖的測定， 具有靈敏度高、選擇性好、不用衍生、操作簡便等有點。但是，離子色譜對試劑、 進樣樣品要求較高，樣品前處理步驟要求嚴格，而且需要專門的離子色譜和脈沖 安培檢測器。毛細管電泳、氣質聯用、核磁共振等方法設備昂貴，不易在國內中 小型蜂蜜生產企業內普及。

發明內容

本發明采用高效液相色譜法，旨在建立一種同時測定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、 蔗糖的方法。

為實現上述目的，一種快速定量蜂蜜品質的高效液相色譜方法，本發明采用 了以下技術方案：收集具有代表性的蜂蜜樣品10～20份，稱取適量樣品，用純乙 腈前處理，供高效液相色譜檢測用。以糖專用分析柱為色譜柱，乙腈-水(75∶25) 為流動相。用示差折光檢測器檢測，外標法定量，計算葡萄糖、果糖和蔗糖的含 量。

所述色譜柱為糖專用分析柱(4mm×250mm)。

所述色譜柱柱溫為35℃。

所述流動相流量為1ml/min。

所述流動相進樣量為10μL。

本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是：

用高效液相色譜分離、測定蜂蜜中的可溶性糖的研究報道很少，本發明利用 高效液相色譜和糖專用分析柱成功地分離了蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖，以乙 腈:水＝75:25為流動相，15min左右即完成色譜分離過程，分離效果良好，測定 的重復性高，檢測靈敏，回收率在97.0％～98.9％之間，前處理和操作簡單。本發 明溶劑采用乙腈和水，可回收利用，無污染，實現清潔生產。既保護消費者利益， 又對蜂蜜生產企業的生產具有指導意義。

具體實施方式

實施例1一種快速定量蜂蜜品質的高效液相色譜方法

1、樣品處理

稱取果糖、葡萄糖分別約100mg、蔗糖約20mg，精密稱定，置50ml量瓶 中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

稱取0.5g蜂蜜樣品，加入2mL純乙腈，65℃水浴10min，10000r/min離 心20min，吸取上清液于25mL的容量瓶，殘渣加入3mL蒸餾水，65℃水浴10 min，10000r/min離心，合并上清液，按此方法再提取一次，合并上清液，并用 蒸餾水定容至25mL，抽取5mL用有機系(0.45μm濾膜)過濾，供高效液相色譜 檢測用。

2、色譜分析條件

島津LC-20A液相色譜儀，色譜柱為糖專用分析柱(4mm×250mm)。示差 折光檢測器。流動相：乙腈-水(75∶25)，柱溫35℃，流量1ml/min，進樣 量10μL。