[發明專利]試劑盒及其應用以及聯合檢測多種氨基酸和肉毒堿的方法

有效

• 申請號: 201410535219.1
• 申請日: 2014-10-11
• 公開（公告）號: CN104237442A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 楊緒慶
• 申請（專利權）人: 楊緒慶
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;金迪

技術領域

本發明涉及一種串聯質譜檢測用試劑盒及其應用以及聯合檢測多種氨基酸和肉毒堿的方法。

背景技術

遺傳性代謝病是一類涉及氨基酸、有機酸、脂肪酸、尿素循環、碳水化合物、類固醇等多種物質代謝的疾病。其種類繁多，是兒科臨床的疑難雜癥。雖然其單一病種患病率較低，但總體發病率較高，對人口素質、家庭乃至社會的發展構成了極大的威脅。其診斷主要依賴實驗室的特異性檢查。

我國每年出生約2200萬新生兒，其中出生缺陷兒占90萬，占世界的20％，平均每30秒出生一名出生缺陷兒，帶給家庭的是沉重的經濟、精神壓力及終身的痛苦；不利于和諧社會建設和醫療體制改革。僅高苯丙氨酸血癥(包括苯丙酮尿癥)這類疾病，每年就新增患兒1600-1800例。液相串聯質譜技術的發展使得這類疾病在發病前進行干預成為可能。即在新生兒出生后體內某些代謝產物出現異常，而尚未出現臨床癥狀或者癥狀不明顯時就早期明確診斷，并進行及時而有效的對癥治療，以避免患兒的重要臟器出現不可逆性損害，進而保障兒童正常的體格發育和智能發育。

串聯質譜檢測氨基酸和肉堿的原理：用于分析的樣品分子(或原子)在離子源中離化成具有不同質量的帶電荷分子離子和碎片離子，這些帶電荷離子在加速電場中獲得相同的動能并形成一束離子進入質量分析器中(可由電場和/或磁場組成)，根據質荷比不同按空間位置、時間先后或運動跡的穩定與否等實現分離，記錄各種檢測到的離子的質量數和豐度，形成質譜圖。通過質譜分析，我們可以獲得分析樣品的分子量、分子式、分子中同位素構成和分子結構等多方面的信息。基于以上理論，通過特定的技術將樣本中的物質提取出來，利用合適的流動液體帶入串聯質譜系統，根據物質的質荷比不同就能測定不同成分的濃度。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供了一種新的用于串聯質譜檢測的試劑盒及其應用，以及利用本發明的試劑盒聯合檢測多種氨基酸和肉毒堿的方法。

為了實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種串聯質譜非衍生法檢測用試劑盒，該試劑盒包括：同位素標準品、提取液和流動相，其中，所述提取液為甲醇濃度為85-99體積％的甲醇水溶液，所述流動相為甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三種組成的混合液。

第二方面，本發明提供了一種使用第一方面所述的試劑盒聯合檢測多種氨基酸和肉毒堿的方法，該方法包括：(1)使用同位素標準品和提取液制備工作溶液；(2)打孔加樣；(3)樣本提取；(4)上機檢測。

第三方面，本發明提供了一種串聯質譜衍生法檢測用試劑盒，該試劑盒包括：同位素標準品、提取液、衍生化溶液和流動相，其中，所述提取液為甲醇濃度為85-99體積％的甲醇水溶液，所述流動相為甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三種組成的混合液。

第四方面，本發明提供了一種使用第三方面所述的試劑盒聯合檢測多種氨基酸和肉毒堿的方法，該方法包括：(1)使用同位素標準品和提取液制備工作溶液；(2)打孔加樣；(3)樣本提取；(4)干燥后加入衍生試劑進行轉化；(5)干燥后加入作為復溶液的流動相，振蕩混勻；(6)上機檢測。

第五方面，本發明提供了第一方面和/或第三方面所述的試劑盒在檢測氨基酸和/或肉毒堿中的應用。

本發明的試劑盒用于串聯質譜檢測時比傳統方法能達到更高的精密度和準確度高，利用外周血制成的干血濾紙片標本，只需3微升血液樣本即可一次性定量10余種氨基酸和30余種肉堿，根據這些指標能篩選40余種先天性遺傳代謝性疾病，大大提高了對疾病的篩查和診斷效率。

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

具體實施方式

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。

本發明提供的串聯質譜非衍生法檢測用試劑盒包括：同位素標準品、提取液和流動相，其特征在于，所述提取液為甲醇濃度為85-99體積％的甲醇水溶液，所述流動相為甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三種組成的混合液。

本發明中，所述同位素標準品包括氨基酸同位素標準品和肉毒堿同位素標準品，均可以為本領域常規使用的標準品，且市售的各種同位素標準品均可以用于本發明，如美國劍橋實驗室提供的同位素標準品，其種類及濃度如下表1所示：

表1