[發明專利]一種高效的腫瘤個體化免疫治療方法及其應用

無效

• 申請號: 201410534622.2
• 申請日: 2014-10-13
• 公開（公告）號: CN104306976A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 黃錫堅;張小俊;高華
• 申請（專利權）人: 深圳市康爾諾生物技術有限公司
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K31/675;A61K39/00;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及一種促進臨床應用自體gp96蛋白個體化治療腫瘤療效的方法及其應用。?

背景技術

惡性腫瘤是嚴重危害人類生命健康的常見病，已成為全球一個主要死亡原因，在2012年造成820萬人死亡，全球癌癥帶來的經濟損失高達8950億美元。由于癌癥的發生是一個逐步積累的過程，發病率與死亡率隨著年齡的增大呈現指數上升的趨勢。而我國隨著國民經濟的發展、醫療衛生的進步和預期壽命的延長，人口分布已進入老齡化階段，且主要人口年齡分布仍在逐年增大，老齡化日趨嚴重。同時環境污染依然嚴重。我國腫瘤發病率呈一個快速增大的態勢。惡性腫瘤已成為我國疾病死亡的第一殺手。近幾年來國內每年新增腫瘤病人220萬人，死亡約160萬人，目前全國腫瘤患者總數估計在450萬人左右。我國居民每死亡的5人中，即有1人死于癌癥。腫瘤病因復雜，治療費用高昂，我國每年用于惡性腫瘤的醫療費用高達1200多億元。由于治療缺乏有效性，我國腫瘤患者5年生存率不足25％，京津滬這樣的大城市也僅為40％。?

應用自體腫瘤組織提取的gp96多肽復合物作為個體化治療性疫苗免疫治療腫瘤，充分考慮到個體間的差異，可以達到最佳治療效果，是當今醫學及藥物學發展的重要方向之一。?

gp96蛋白存在于細胞內質網膜內，是熱休克蛋白家族成員之一。gp96作為分子伴侶在蛋白折疊與運輸過程中發揮重要作用；同時它能結合細胞中5-25個氨基酸的抗原多肽，從腫瘤組織純化的gp96-多肽復合物是最能代表腫瘤組織的抗原肽庫。皮下免疫gp96-多肽復合物后，gp96復合物通過抗原呈遞細胞（APC)表面受體分子進入細胞并將結合的抗原表位呈遞給MHC?I類和II類分子，從而啟動患者腫瘤特異性T細胞免疫應答。?

研究表明腫瘤具有個體特異性，腫瘤的特異性不僅表現在腫瘤類型之間，還表現在不同個體之間。即使是同種類型腫瘤，不同個體的腫瘤生物學和免疫學特性也存在顯著差別。這使得針對已知腫瘤抗原而設計的腫瘤疫苗不能有效激發針對腫瘤細胞的免疫反應。而腫瘤自體gp96抗原復合物攜帶了完整的腫瘤個體信息，應用該復合物免疫治療充分考慮了個體間的差異，并利用gp96天然T細胞佐劑的特性，可以達到最佳治療效果。?

臨床試驗已經證明，自體熱休克蛋白gp96復合物能夠激活腫瘤特異性T細胞，對術后殘留的腫瘤細胞，包括休眠腫瘤細胞和腫瘤干細胞進行有效殺傷和清除，可以達到延緩腫瘤復發和延長患者生命的效果。應用熱休克蛋白gp96自體疫苗激活腫瘤特異性T?細胞，對于治療腎癌、黑色素瘤及腦膠質瘤等安全有效，顯著延長患者生存期。接受自體gp96治療的黑色素瘤MIa和Mlb期患者平均存活期比對照治療延長18.4個月（31.2?vs?12.8月，P?=?0.03，危險比HR?=?0.?45)。接受gp96自體疫苗治療的未轉移中等風險腎癌患者(包括I/II期，III期的T1/2/3)，復發時間延長45%(P<0.01,?危險比HR?=?0.55)，與對照相比復發時間延長約1.8年，同時接受治療的患者存活期延長。接受治療的復發性膠質母細胞瘤患者中位生存期延長83%（47.6周?比?26周）。因此該治療方法已經于2008年在俄羅斯批準上市治療腎癌，并被美國FDA和歐盟EMA批準作為治療黑色素瘤、腦膠質母細胞瘤、腎癌的孤兒藥。?

調節性T細胞（Treg)是一群具有抑制功能的T細胞亞群，能夠在獲得性免疫、天然免疫過程中發回抑制作用，主要特征是表達CD4陽性、CD25高表達和Foxp3陽性。有證據表明Treg細胞比例增高或數量增多是腫瘤患者免疫耐受的一個重要機制。有證據表明，去除或者減少Treg細胞能增強機體針對病毒、腫瘤等疾病的免疫反應，或者增加自身免疫病的發生危險。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是如何在臨床水平有效的個體化免疫治療惡性腫瘤。?

本發明的一個目的是提供一種腫瘤個體化免疫治療的方法。該方法的一個要點是從患者手術切除的腫瘤組織制備自體gp96-抗原復合物作為個體化疫苗。該方法的另一個要點是在患者免疫時有效抑制調節性T細胞增強個體化疫苗的免疫效果。?

上述的gp96-抗原復合物是將手術切除的腫瘤組織充分研磨破碎，離心獲得的上清勻漿液依次進行ConA親和層析和強陰離子交換層析得到的；上述手術切除的腫瘤組織包括但不限于食管癌組織、肺癌組織、胰腺癌組織、結腸癌組織、直腸癌組織、肝癌組織、腎癌組織、胃癌組織等；上述純化步驟包括如下步驟：?