[發明專利]甲萘威膠體金試紙條的制備及使用方法

在審

• 申請號: 201410534140.7
• 申請日: 2014-10-11
• 公開（公告）號: CN105486858A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發明（設計）人: 洪霞;江振飛;薛永來
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中甲萘威藥物殘留的一種快速膠體金試紙條的制備及使用方法。

背景技術

甲萘威又名西維因，一種氨基甲酸酯殺蟲劑。工業產品為白色固體，純品熔點142℃，在水中溶解度極小,在多數有機溶劑中溶解度不大，易溶于極性有機溶劑，化學性質穩定，但遇堿易分解。毒性較低,急性毒性LD50值:對大白鼠經口為500～850mg/kg。用于稻、棉、果林茶桑等作物上的螟蟲、稻縱卷葉螟、稻苞蟲、棉鈴蟲、紅鈴蟲、斜紋夜蛾、棉卷葉蟲、桃小食心蟲、蘋果刺蛾、茶小綠葉蟬、茶毛蟲、桑尺蠖、大豆食心蟲等。

甲萘威的檢測方法有薄層色譜法，氣-質聯機和高效液相色譜法，由于以上諸分析法樣品前處理比較復雜，操作時需專門的技術人員、檢測費用昂貴，不利于推廣應用。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種特異性強，靈敏度高，且操作簡單方便，對樣品經過簡單處理即可檢測的甲萘威快速試紙半定量檢測方法。

本發明的目的可通過以下技術方案來實現

甲萘威膠體金試紙條檢測方法其技術要點是：試紙的背襯上依次貼有樣品墊和金標墊和硝酸纖維素膜和吸水吸水紙，金標墊上被標記的物質為第二種屬動物蛋白與甲萘威抗原的混合物或第二種屬動物蛋白與甲萘威抗體的混合物；硝酸纖維素膜上包被有甲萘威抗體1條作為檢測線，同時還包被有抗第二種屬動物蛋白的IgG1條作為參考線或包被有甲萘威抗原1條作為檢測線，同時還包被有抗第二種屬動物蛋白的工IgG1條作為參考線。在試紙制備時通過調節檢測線和參考線包被物的濃度，控制檢測時檢測線和參考線的顯色深淺，并將其顯色深淺與標準物質濃度對應起來，達到半定量檢測。

所述的檢測用抗原是指甲萘威與載體物質明膠形成的偶合物，免疫用抗原是指甲萘威與載體物質匙孔血藍蛋白（KLH）形成的偶合物。

所述的載體物質也可以選用其他大分子物質，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求檢測用抗原與免疫用抗原的載體無交叉免疫反應。

所述的第二種屬動物蛋白指非抗體來源屬動物的蛋白，例如，抗體為兔源性，則第二種屬動物蛋白可以是卵清白蛋白、豬血清白蛋白等雞、鴨或其他非兔源性動物蛋白。

本發明所描述的試紙的各部分處理與功能如下：

背襯：為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用；

樣品墊制備：將濾紙或玻璃纖維紙浸入pH7.0-8.4的PBS中約莫2min，取出，80℃烘干或其他方式干燥，即作為樣品墊，檢測時起吸收樣品溶液的作用，便于樣品溶液向上移動；

金標墊的制備：該部分起固定膠體金標記的抗原或抗體的作用；

制備步驟包括膠體金溶液的制備、膠體金標記甲萘威抗原或甲萘威抗體。

（1）膠體金溶液的制備：將氯金酸（HAuCl₄）用超純水配制成1%的母液，取1mL的母液，用超純水定容至100mL，配成0.01%的溶液，加熱至沸騰，加入1–5mL1%的檸檬酸三鈉水溶液，繼續加熱至出現透明的橙紅色為止，即為膠體金溶液。

（2）膠體金標記甲萘威抗原：將甲萘威抗原和第二種屬動物蛋白分別用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）溶解稀釋至2-4mg/mL，每100mL膠體金溶液加入1-3mL的2-4mg/mL的檢測用抗原1-1.5mL2-4mg/mL第二種屬動物蛋白震蕩2min，用0.2mol/L的K₂CO₃，調節pH至8.4，震蕩5min加入11%PEG-100002mL，震蕩5min，6000-13000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）復溶，以8000-15000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）釋500-2000倍產物作為金標記甲萘威抗原。