[發明專利]辛硫磷膠體金檢測卡

在審

• 申請號: 201410534129.0
• 申請日: 2014-10-11
• 公開（公告）號: CN105572361A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 杜道林;洪霞;吳明慧
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是辛硫磷試紙檢測方法。

背景技術

辛硫磷的國際通用名稱為Phoxim，有肟硫磷等多種名稱，是生產中常用的廣譜性有機磷殺蟲劑。利用辛硫磷的胃毒、觸殺和在黑暗條件下殘效長等特性，防治天牛等蛀干性害蟲，符合環保、經濟、安全和高效的原則。

物理性狀為黃色液體（原藥為紅棕色油），熔點6.1℃，沸點在蒸餾時分解，密度1.178g/mL(20℃)o溶解度：水1.Smg/L(20℃)。甲苯、正己烷、二氯甲烷、異丙醇均大于200g/L，徽溶于脂肪烴類。在植物油和礦物油中緩慢水解，在紫外光下逐漸分解。

本品為低毒有機磷殺蟲劑。能抑制膽堿酯酶活性。中毒癥狀有頭痛、頭昏、惡心、多汗、流涎、瞳孔縮小、腹痛等癥狀。

我國已制定的一些農副產品中的農藥最高殘留限量表中辛硫磷的限量為谷類（以原糧計）、蔬菜、水果不得超過0.05mg/kg。

發明內容

本發明目的在于提供快速檢測出食品中辛硫磷的殘留。

本發明的技術方案是辛硫磷的檢測卡及其檢測樣品的處理方法。辛硫磷的檢測卡是在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼內設置檢測條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條是由支承背板上粘貼四種原件組成：支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端上粘貼吸水紙，另一端粘貼樣品墊，吸水紙內端與硝酸纖維素膜搭接，樣品墊與硝酸纖維素膜之間則有一段金標墊，由金標墊將樣品墊與硝酸纖維素膜連接在一起。金標墊中是含有第二種屬蛋白和辛硫磷抗體的混合物，硝酸纖維素膜上橫向有2條間隔開的顯色印記帶，一條是含辛硫磷蛋白質偶聯物的檢測帶，另一條是第二種屬動物蛋白的IgG（常用的為抗兔抗體或抗鼠抗體）；測試條置入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。

樣品處理方法是：稱取試樣2±0.05g于50mL的離心管中，加入10mL超純水，在1800r/min條件下用高速組織粉碎機打碎（約1min），取粘稠液加50%三氯乙酸2mL和二氯甲烷10mL，在回旋式振蕩器上高速振搖30min。然后在4℃5000rpm條件下離心30min，取上清10mL，加二氯甲烷2mL，在回旋加速器上振蕩混合20min，再在4℃12000rpm條件下離心30min，上清液即為藥物的抽提液。

本發明的優點是能快速檢測出樣品中含有的辛硫磷，且節省檢測成本，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結果準確。

附圖說明

圖1是辛硫磷檢測卡外殼及檢測試紙條在外殼內的安置圖。

圖2是辛硫磷檢測卡檢測試紙條結構示意圖。

圖3是檢測試紙條硝酸纖維素膜上顯示印跡帶示意圖。

具體實施方式

1.標記膠體金的制備

膠體金溶液的制備：先將1g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100mL超純水配置成1%的氯金酸溶液；再取1L超純水于特質電爐上加熱，至沸騰后加入10mL1%的檸檬酸三鈉水溶液，沸騰后繼續加熱，5分鐘后加10mL1%的氯金酸溶液，再次加熱至沸騰，等待顏色變為酒紅色后開始計時，10分鐘后停止加熱，取下后自然冷卻、定容至1L，即為膠體金溶液。

抗體標記：確定抗體所需的0.1mol/lK₂CO₃的比例，取100mL膠體金溶液，加入此比例0.1mol/L的K₂CO₃，混勻（約5min），再將辛硫磷和第二種屬動物蛋白分別用PBS（0.01mo1/L，pH7.4）溶解稀釋至2mg/mL，加入2mL2mg/mL的辛硫磷抗體（或2mL2mg/mL第二種屬動物蛋白），混勻（5min），最后加入10%BSA2mL，混勻（5min）。離心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即為金標辛硫磷抗體。

膠體金標記部分處理：將辛硫磷抗體稀釋后，按一定比例將載體（如玻璃纖維、聚酯膜等）浸透，鋪均勻，取出放于37℃恒溫烘箱烘制8-12h，干燥后即作為膠體金標記部分。

2.免疫層析專用高分子復合膜制備

首先用一種硝酸纖維素膜制成透明背襯膜，在背襯膜上覆蓋一層對蛋白質結合力強，浸潤性能好的具有一定孔徑的層析膜。背襯膜的作用是阻止粘合劑中的有機溶劑對層析膜上蛋白質的破壞。

3.層析膜的點樣方法