[發明專利]石油降解菌群與表面活性劑聯合降解水中脫水原油的方法

有效

• 申請號: 201410532922.7
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN104353667A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 趙和平;孟帆;溫麗蓮;賴春宇;羅一豪;陳冉
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10;B09C1/08
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

技術領域

本發明屬于環境生物技術領域，特別涉及一種微生物與表面活性劑聯合降解脫水原油的方法。?

背景技術

石油是現代社會的最主要能源之一，被稱作“工業的血液”、“黑色的金子”。原油經過提煉可以制成各種燃料和化工原料，包括天然氣、汽油、煤油、揮發油、潤滑油、石蠟和瀝青等。但在原油的加工、使用及運輸過程中不可避免的會造成溢灑及泄漏事故，造成污染。石油是由多種烴類、少量非烴化合物組成的復雜混合物。原油難以被降解，長時間存在于環境中。國內外處理石油污染有物理方法、化學方法、生物方法三類，其中物理方法包括焚燒法、隔離法和換土法等，化學方法主要有萃取法、土壤洗滌法以及化學氧化法等。物理方法及化學方法存在處理成本高、污染物處理不徹底的問題。?

微生物降解原油的方法也存在一定的局限性，比如速率低、周期長等。原油污染物多屬于疏水性有機污染物，提高污染物溶解于水中的含量能夠提高石油烴降解菌的降解效率。許多石油烴降解菌在降解過程中會產生生物表面活性劑，對疏水污染物起到增溶、乳化的作用。但是微生物自身分解表面活性劑效率較低，所以通過外加表面活性劑的形式促進其降解是一種可行方法。市面上表面活性劑種類龐多，而且大多數表面活性劑對于微生物都有毒性影響。對于本身降解效率很低的微生物方法來說，過低的表面活性劑濃度甚至未達到臨界膠束濃度而不能起到促進修復的作用，而過高的表面活性劑濃度又會毒害微生物。所以，研究不同種類、不同濃度的表面活性劑與微生物聯合的修復效果具有非常重要的意義。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是，克服現有技術中的不足，提供一種微生物與表面活性劑聯合降解脫水原油的方法。?

為解決技術問題，本發明的解決方案是：?

提供一種微生物與表面活性劑聯合降解脫水原油的方法，具體步驟如下：?

(1)石油烴降解菌群的富集：?

a：將65mg?K₂HPO₄、25.5mg?KH₂PO₄、133.8mg?Na₂HPO₄·12H₂O、500mg?NH₄Cl、82.5mg?CaCl₂、67.5mg?MgSO₄·7H₂O、0.75mg?FeCl₃·6H₂O和1000mL去離子水進行混?合，調節pH值為7.0；取配制好的溶液100mL加入到1L的三角瓶中，在120℃溫度下滅菌20min，得到裝有石油烴降解菌培養基的三角瓶；?

b：稱取1g石油污染土壤樣品，放入到前述三角瓶中；三角瓶放置在恒溫振蕩箱中，保持溫度30℃、轉速180r/min，培養5天；?

c：按步驟a中方法獲得第二個有石油烴降解菌篩選培養基的三角瓶，吸取10mL步驟b三角瓶中的培養液轉移至該第二個三角瓶中，并加入0.01g原油，然后將該第二個三角瓶放置在恒溫振蕩箱中，保持溫度30℃、轉速180r/min，培養5天；?

d：吸取10mL步驟c中經5天培養后的培養液，并按照步驟c的方法進行再培養；重復再培養3次后，最終得到的液體為石油烴降解菌群；?

(2)加入表面活性劑對脫水原油進行降解：?

取上述步驟(1)的步驟a中獲得的石油烴降解菌培養基10mL，取上述步驟(1)的步驟d中得到的石油烴降解菌群1mL，一并放入到50mL的三角瓶中；然后在該三角瓶中加入脫水原油0.01g；再加入表面活性劑1mL；放置在恒溫振蕩箱中，保持在溫度30℃、轉速180r/min條件下進行培養以降解所加入的脫水原油。?

本發明步驟(2)中所述表面活性劑是下述任意一種：?

濃度22.27mg/L的聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(Tw-80)；濃度2500mg/L的十二烷基硫酸鈉(SDS)；濃度1000mg/L的十二烷基苯磺酸鈉(LAS)；?

聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯與十二烷基硫酸鈉混合液(Tw-80+SDS)，其中聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯與十二烷基硫酸鈉混合液的摩爾比為1∶30，聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯的濃度為26.30mg/L；?

聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯與十二烷基苯磺酸鈉的混合液(Tw-80+LAS)，其中聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯與十二烷基苯磺酸鈉的混合液的摩爾比為1∶30，聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯的濃度22.27mg/L。?