[發(fā)明專利]含目標(biāo)基因組DNA片段植株的選育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410532337.7
• 申請(qǐng)日: 2014-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN105567790B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周發(fā)松;喻輝輝;劉剛;楊燕宇;韋懿;陳光;姚玥;李菁;宋丁丁;李旭;潘麗;張學(xué)堂;陸青;邱樹青;何予卿;李榮田;張啟發(fā)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國種子集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.抗稻瘟病基因重組DNA片段，其特征在于，所述重組DNA片段從5′端至3′端由SEQ IDNo.1所示的核苷酸序列，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之間的核苷酸序列，以及SEQ ID No.2所示的核苷酸序列組成；所述SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之間的核苷酸序列包括水稻‘K22’中具有稻瘟病抗性的部分基因區(qū)段；

其中，SEQ ID No.1所示的核苷酸序列位于水稻第6染色體的10182031bp-10183804bp區(qū)間，SEQ ID No.2所示的核苷酸序列位于水稻第6染色體的10748091bp-10750733bp區(qū)間。

2.用于檢測(cè)權(quán)利要求1所述抗稻瘟病基因重組DNA片段的方法，其特征在于，根據(jù)SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，分別設(shè)計(jì)特異性PCR擴(kuò)增引物，以待測(cè)水稻基因組為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)，并分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

用于擴(kuò)增及檢測(cè)SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的引物組合為：

組合I

擴(kuò)增引物：A08X21F:5’-AGCCCTGTCATTCTCGTGT-3’

A08X21R:5’-AAAGGACAGGTGGAGATGG-3’

測(cè)序引物：A08X21F:5’-AGCCCTGTCATTCTCGTGT-3’

組合II

擴(kuò)增引物：A08X31F:5’-ACAAGCCCAGTTGGAGAATC-3’

A08X31R:5’-AAGGGCATACTGGAGAAGATG-3’

測(cè)序引物：A08X31F:5’-ACAAGCCCAGTTGGAGAATC-3’

A08X31F2:5’-GCTCGATGCTACTCATATGC-3’

組合III

擴(kuò)增引物：A08X22F:5’-ACCCGTGGAAGCTGAAGGT-3’

A08X22R:5’-AAACCGATCCGAAACCACC-3’

測(cè)序引物：A08X22F2:5’-GCCTGTGTGTGTCAGATGAGC-3’

用于擴(kuò)增及檢測(cè)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的引物組合為：

組合IV

擴(kuò)增引物：A08X35F:5’-GATGACGTGTCACCCTGAC-3’

A08X35R:5’-ATGAGCCGATCTCTATGAGAG-3’

測(cè)序引物：A08X35R:5’-ATGAGCCGATCTCTATGAGAG-3’

A08X35R2:5’-GGTGTCATTTCCGCGTTGG-3’

組合V

擴(kuò)增引物：A08X46F:5’-CATGCACGATGGCTCTATCATGCA-3’A08X46R:5’-GATGTGACCAGTGCAACTTCGTCA-3’

測(cè)序引物：A08X46F3:5’-GATTCTGGATGTAACATGAGA-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，采用Sanger測(cè)序法分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

4.權(quán)利要求2中用于擴(kuò)增SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列的引物組合I～V在檢測(cè)含抗稻瘟病基因重組DNA片段植株中的應(yīng)用，其中所述引物的定義同權(quán)利要求2中所述。