[發明專利]伏馬菌素B1的十二肽抗原模擬表位及其應用

有效

• 申請號: 201410529473.0
• 申請日: 2013-03-06
• 公開（公告）號: CN104356207B
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 何慶華;許楊
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司36115
• 代理人: 施秀瑾,劉華

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及伏馬菌素B₁抗原模擬表位及其應用。

背景技術

伏馬菌素B₁(Fumonisins B₁，FB₁)是一種常見的真菌毒素，主要由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme) 產生研究表明，FB₁對人類及動物具有較強的毒性作用，包括神經毒性、生殖毒性、胚胎毒性及致畸致癌等，國際癌癥研究中心已把FB₁化分為2B組，即對人類可能的致癌物。目前，多數國家已經對谷物、糧食及食品中FB₁的殘留含量設定了限量標準，如聯合國糧農組織（FAO）規定每日最大允許攝入 FB₁，FB₂，FB₃ 總量為 2 μg/kg 體重；瑞士規定糧食中 FB₁ 和 FB₂總殘留限量為 1000 μg/L。

目前，檢測食品中FB₁的方法主要有高效液相色譜、氣相色譜、薄層色譜及免疫學檢測等方法，免疫學檢測方法以其靈敏度高、檢測方便、成本低廉等優勢在FB₁的檢測中得到了廣泛的應用。然而，在建立免疫學檢測方法的過程中，必須使用FB₁標準品為原料來制備競爭抗原或者固相包被抗原，FB₁不僅價格昂貴而且具有極強的致癌性，對檢測人員的健康和環境造成極大的威脅，從而在一定程度上制約了免疫學檢測方法的應用和推廣。有鑒于此，人們開始采用抗獨特型抗體及抗原模擬表位技術來實現有害小分子物質標準品的替代，并取得了一定的進展。噬菌體展示肽庫技術的主要特點是可有效地篩選出與目標靶體特異結合的噬菌體展示多肽，該技術在探索受體與配體之間相互作用結合位點、尋求高親和力生物活性的配體分子、探索未知蛋白質空間結構表位、新型疫苗的研制等方面應用廣泛。

本發明通過用噬菌體展示肽庫技術，從肽庫中篩選出能與靶分子（抗FB₁單克隆抗體）特異性結合的多肽（抗原模擬表位），該抗原模擬表位具有與天然FB₁分子相似的免疫反應特性，通過獲得的FB₁抗原模擬表位，以代替價格昂貴且毒性強的FB₁標準品，并作為競爭抗原或固相包被抗原應用于FB₁的免疫學檢測。

發明內容

本發明以抗FB₁單克隆抗體為靶分子，將靶分子固相包被于酶標板上，投入噬菌體隨機展示十二肽庫，進行親和淘選，獲得了七種FB₁的抗原模擬表位。它們的氨基酸序列如下：

NNAAMYSEMATD、FYTSPGRTSHYM、IHQELRYTKDSP、GDGVHKSHDIRG、TTLQMRSEMADD、SMLNDYRDYTTH、TRDKSSMLERWP。

本發明還涉及編碼上述抗原模擬表位氨基酸序列的核苷酸序列，分別對應為：

AATAATGCGGCGATGTATTCGGAGATGGCTACTGA、TTTTATACTAGTCCGGGTCGGACGAGTCATTATATG 、ATTCATCAGGAGTTGCGTTATACTAAGGATTCTCCG、GGGGATGGGGTGCATAAGTCGCATGATATCCGTGGG、ACTACGCTTCAGATGCGTAGTGAGATGGCTGATGAT、TCGATGCTTAATGATTATCGTGATTATACTACTCAT、ACTCGGGATAAGTCGTCGATGTTGGAGCGTTGGCCG

上述抗原模擬表位（多肽）結構中，大寫英文字母分別代表二十一種已知天然L-型氨基酸殘基或其D-型異構體的一種，C代表半胱氨酸殘基，D代表天冬氨酸殘基，P代表脯氨酸殘基，R代表精氨酸殘基，K代表賴氨酸殘基，H代表組氨酸殘基，I代表異亮氨酸殘基，V代表纈氨酸殘基，Y代表酪氨酸殘基，S代表絲氨酸殘基，F代表苯丙氨酸殘基，E代表谷氨酸殘基，M代表甲硫氨酸殘基，G代表甘氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，Q代表谷氨酰胺殘基，W代表色氨酸殘基，N代表天冬酰胺殘基，A代表丙氨酸殘基，T代表蘇氨酸殘基。