[發明專利]獨一味的HPLC檢測方法及指紋圖譜檢測技術

有效

• 申請號: 201410528050.7
• 申請日: 2014-10-09
• 公開（公告）號: CN104237440A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 古銳;鐘世紅
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;杜朗宇

技術領域

本發明涉及獨一味的HPLC檢測方法及指紋圖譜檢測技術。

背景技術

獨一味Lamiophlomis?rotata(Benth.)Kudo系大宗常用藏藥，功能活血止血，祛風止痛，臨床廣泛用治外科手術后的刀口疼痛、出血、風濕痹痛等癥，療效確切，鎮痛作用尤其顯著^[1]，具有廣闊的應用前景。

獨一味藥材來源全部依靠野生資源，由于其需求量劇增，資源緊缺，被列為一級瀕危藏藥。為了保護日益減少的獨一味野生資源，2010年版中國藥典將其入藥部位由全草修訂為地上部分^[2]。然而，現有關于獨一味藥材質量控制的報道主要集中在根及根莖^[3]或全草^[4]，較少涉及地上部分^[5]。現代研究表明，獨一味的活性成分主要有3大類^[6，7]：環烯醚萜苷類化合物，具有很好的止血、促凝血作用，是止血活性成分；苯乙醇苷類化合物，具有抗炎、抗氧化活性；黃酮類化合物，具有鎮痛止血、抗炎、抗腫瘤活性。現有報道多為采用HPLC法測定其中1～2類成分^[5，8]，尚無同時檢測3類以上成分的相關報道。

發明內容

為了進一步完善獨一味的質量控制標準，本發明擬采用HPLC法對獨一味地上部分樣品進行分析評價，并希望指認涵蓋環烯醚萜苷、苯乙醇苷、黃酮、咖啡酰4類成分的化合物，能更加全面反映該獨一味藥材的成分特征，可為該藥材的質量控制提供科學依據。

本發明提供了獨一味的HPLC檢測方法，它包括如下操作步驟：

(1)取待檢藥材，以甲醇或含水甲醇提取，制備供試品溶液；

(2)將供試品溶液注入高效液相色譜儀中，檢測即可，色譜條件如下：

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料

檢測波長：235nm±5nm

流動相：A：乙腈，B：0.1～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脫程序為：0～10min，5％～8％A；10～27min，8％～12％A；27～35min，12％～12％A；35～70min，12％～17％A；70～80min，17％～19％A；80～110min，19％～36％A；110～120min，36％～50％A。

進一步地，步驟(1)中，所述含水甲醇中甲醇濃度為50～90％，優選為65～75％，更優選為70％。

更進一步地，步驟(1)中，提取的方法選自回流、超聲、浸漬或滲漉。

進一步地，步驟(2)中，磷酸水溶液濃度為0.1％～0.3％，優選為0.1％。

進一步地，所述色譜柱的尺寸為4.6mm×250mm，5μm。

更進一步地，色譜柱柱溫為30±2℃。

進一步地，所述檢測方法中，選用胡麻屬苷、山梔苷甲酯、綠原酸、馬錢苷、8-O-乙酰山梔苷甲酯、連翹酯苷B、木犀草苷、麥角甾苷中的一種或兩種以上的組合物為對照品。

本發明還提供了獨一味的HPLC指紋圖譜檢測方法，它包括如下操作步驟：

(1)取待檢藥材，以甲醇或含水甲醇提取，制備供試品溶液；

(2)將供試品溶液注入高效液相色譜儀中，檢測即得供試品指紋圖譜，色譜條件如下：

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料

檢測波長：235nm±5nm

流動相：A：乙腈，B：0.1～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脫程序為：0～10min，5％～8％A；10～27min，8％～12％A；27～35min，12％～12％A；35～70min，12％～17％A；70～80min，17％～19％A；80～110min，19％～36％A；110～120min，36％～50％A；

(3)將供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜比較，各共有峰保留時間相似度在0.9以上的藥材即為獨一味；其中，對照指紋圖譜中，共有峰14個，以山梔苷甲酯為參照峰，各共有峰相對保留時間如下：0.65、0.68、0.77、1、1.20、1.26、1.50、1.58、2.44、3.16、3.28、3.39、3.72、4.13。