[發明專利]一種豬冷凍精液保藏方法

有效

• 申請號: 201410526704.2
• 申請日: 2014-10-08
• 公開（公告）號: CN104255704A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 吳井生;楊劍波;肖安磊;邢軍
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

1.?一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于包括如下步驟：

對采集精液稀釋后降溫到17℃，測量精子密度，離心后測量上清液精子密度，等溫下加入冷卻保護液稀釋，稀釋液計算公式為式（I）所示：

稀釋液總量=（稀釋后精子密度－上清液精子密度）×體積/7億???????????????????????（I），

進一步降溫到4~5℃，再加入冷凍保護液進封裝冷藏；根據冷凍曲線降溫恒定到-120℃后，儲藏在液氮罐中；

所述冷凍曲線的過程是：從4~5℃以2℃/min的降溫速度降溫至-5℃，再以60℃/min降溫速度降溫至-140℃，然后回到-120℃維持10min。

2.?根據權利要求1所述的一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于：采集精液的稀釋步驟為：

取1000ml無菌雙蒸水水浴鍋中加熱至30~38℃，再加入原精稀釋液粉溶解獲得原精稀釋液，穩定1小時待用；采集精液、原精稀釋液按1：0.5的比例等溫稀釋，放入17℃冰箱中平衡40分鐘。

3.?根據權利要求1或2所述的一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于：將稀釋后精液降溫到17℃后立即進行離心，17℃等溫環境下，800g離心12.5min，并吸除上清液。

4.?根據權利要求1所述的一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于：加冷卻保護液稀釋后的體積為最終體積的一半，加完稀釋液后，于4℃環境下降溫平衡，1h后水杯中加冰塊或周圍加冰袋促使其快速降溫至4-5℃；0.5h后等量等溫加入冷凍保護液，加入后平衡45分鐘裝管。

5.?根據根據權利要求1所述的一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于：封裝時利用細管容納冷藏精液，水平放置，封口后將管內氣泡晃動到管中央。

6.?根據根據權利要求1所述的一種豬冷凍精液保藏方法，其特征在于：冷凍采用將容納有冷凍精液的細管置于液氮上方的方式，通過控制與液氮液面的距離，在-80℃~-120℃之間調節，8min后投入液氮獲得凍精。