[發明專利]一種植物病原真菌密封載玻片標本的制作方法

在審

• 申請號: 201410525853.7
• 申請日: 2014-10-09
• 公開（公告）號: CN104374616A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 段維軍;郭立新;顧建鋒;陳先鋒
• 申請（專利權）人: 寧波檢驗檢疫科學技術研究院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

技術領域

?本發明屬于密封載玻片標本制作，具體涉及一種植物病原真菌密封載玻片標本玻片的制作方法。

背景技術

植物病原真菌是指能夠造成植物病害、?利用柯赫法則可以加以鑒定的一類真菌病原物。該類真菌以多種機制影響植物生長發育，造成植物出現不同程度的病害。準確、有效地鑒定和檢測這些病原物是進行檢疫、監測及防治等工作的重要基礎。

對植物病原真菌進行分類鑒定和形態研究，?一般首先要制作真菌玻片，真菌玻片可以分為臨時玻片和永久玻片，?目前臨時玻片制作一般直接用水做浮載劑，蓋上蓋玻片后直接觀察，但臨時玻片只能保存使用數十分鐘，時間稍長水分便會揮發，影響進一步觀察，并容易形成氣泡，且不能進一步封固保存。也有人用乳酚油做浮載劑，蓋上蓋玻片后，蓋玻片周圍涂上透明的指甲油、樹脂或凡士林等封片固定，?這種臨時玻片可保存標本數天至數周，但其制片過程較為復雜，不易長時間保存，影響觀察。但是乳酚油容易產生氣泡，還可能影響某些真菌孢子的大小，甚至有時可使某些真菌孢子破裂。乳酚油中含酸，可溶解真菌色素。同時乳酚油的折射率與孢子和菌絲體非常相近，比較難于觀察和測量，且難于封固玻片。乳酚油中苯酚氣味較重，并且有致癌作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種植物病原真菌密封載玻片標本的制作方法，?該制作方法制作簡單，無毒無副作用，易于觀察，保存期較長的臨時玻片。

本發明所要解決的技術問題是一種植物病原真菌密封載玻片標本的制作方法，?步驟如下?：

a、在載玻片中央滴加浮載劑2.5μL，所述浮載劑為甘油：乳酸：蒸餾水以體積比2:1:1比例配制得到；浮載劑作用在于防止干燥和光線擴散；

b、用挑針挑取植物病原真菌的菌絲體或子實體，置于載玻片上的浮載劑內，在解剖鏡下觀察并調整植物病原真菌形態；

c、在載玻片上的浮載劑的左上角和右下角各放置一塊體積為?2～3?mm³的石蠟，在石蠟和浮載劑上蓋上蓋玻片，載玻片置于64?℃的加熱板上加熱，待石蠟融化后自然冷卻，得到植物病原真菌密封載玻片標本。石蠟具有很好的密封性，且不溶于水，不對標本造成影響，克服了一般方法制作的標本在較短時間會干，不能長時間保存和觀察的缺點。

與現有技術相比本發明的優點在于一種植物病原真菌密封載玻片標本的制作方法，該方法通過以無毒無副作用的甘油、乳酸、蒸餾水混合液作為浮載劑，再用石蠟熱融形成均勻的蠟環封固蓋玻片，冷卻后成為致密的密閉環境，得到植物病原真菌密封載玻片標本，石蠟既作為支撐物，又作為封固劑，不用涂上指甲油、樹脂或凡士林等封片劑，操作簡單，載玻片加熱時氣體受熱會自動逸出，植物病原真菌密封載玻片標本可保存標本6個月以上，因此是一種安全便捷，無毒無副作用，易于觀察，保存期較長的臨時玻片。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。

實施例1

1、通過培養大麗輪枝菌V1，獲得純培養的V1菌絲體、微菌核、輪枝狀分生孢子梗和分生孢子；2、按照甘油：乳酸：蒸餾水體積比為2:1:1的比例，配制成無毒無副作用的浮載劑10mL，滅菌后備用；3、在干凈載玻片中央使用移液器滴加浮載劑2.5μL，用滅菌挑針挑取上述已培養好的V1菌絲體或微菌核或輪枝狀分生孢子?；蚍稚咦樱糜谳d玻片上的浮載劑內，在解剖鏡下觀察并調整V1菌絲體等形態，使得各種微觀形態較為清晰可見；4、在載玻片上浮載劑的上角和右下角各放置一塊體積為?2～3?mm³的石蠟，在石蠟和浮載劑上蓋上蓋玻片，載玻片置于64?℃的加熱板上加熱（加熱時間大約為30-40?s），待石蠟融化后自然冷卻，得到植物病原真菌密封載玻片標本。5、在蓋玻片上加貼包括植物病原真菌中文名、學名、寄主、來源、采集地等相關信息的紙質標簽，用膠水粘貼在蓋玻片相應位置上，制作完成，可保存6個月以上。6、將密封好的載玻片標本水平的放在顯微鏡的載物臺上?；7、開啟顯微鏡，調整顯微鏡亮度，將顯微鏡調整到聚焦狀態，對玻片標本進行顯微觀察，觀察容易。

實施例2

????與實施例1基本相同，所不同的只是大麗輪枝菌由黑白輪枝菌替代，當然也可以由其它植物病原真菌替代，在此不一一列舉。