[發(fā)明專利]一株高耐受苯胺降解菌及其應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410524894.4
• 申請日: 2014-10-08
• 公開（公告）號: CN104560777A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設計）人: 劉洋;陳熒;倪芳;姚忠
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/38
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株高耐受苯胺降解菌種及其應用。

背景技術(shù)

????苯胺是染料工業(yè)中最重要的中間體之一，可用于制造酸性墨水藍G、靛藍等多種染料；在農(nóng)藥工業(yè)中用于生產(chǎn)許多殺蟲劑、殺菌劑；苯胺也是橡膠助劑的重要原料，同時也是生產(chǎn)香料、塑料等的中間體。苯胺類有毒污染物毒性大、難降解，對生態(tài)環(huán)境造成嚴重污染。因此，研究苯胺及其衍生物的生物降解對于保護環(huán)境及提高人類健康具有重要意義。

????高濃度苯胺廢水在工業(yè)排放廢水中屬于難處理種類之一。國內(nèi)對高耐受性的苯胺降解微生物的研究較少，針對于此，篩選高濃度條件下的苯胺高效降解菌并了解其降解特性，可為高濃度苯胺類廢水的工業(yè)化處理提供微生物菌劑資源，從而對解決高濃度苯胺類廢水生物處理系統(tǒng)的問題奠定基礎。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的是提供了一種高耐受苯胺降解菌，該菌可應用于苯胺類廢水的生物強化處理，為降解廢水生物處理系統(tǒng)中的高濃度苯胺類物質(zhì)提供幫助。

本發(fā)明的第二目的是提供該菌株在處理苯胺污水中的應用。

????為了實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

????一、本發(fā)明通過篩選獲得一株高耐受苯胺降解菌種，其特征在于，其屬于蒼白桿菌屬（Ochrobactrum?sp.），命名為苯胺降解菌MC-01（Ochrobactrum?sp.?MC-01），?已于2014年6月10日保藏，保藏單位全稱為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱為CGMCC，保藏編號為CGMCC??1.12930。

???本發(fā)明菌種的形態(tài)學及生理生化特征如下：

???它為革蘭氏陰性好氧菌，桿狀；在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上形成乳白色菌落，圓形、半透明，表面光滑，邊緣圓滑狀，易挑起。

???本發(fā)明的高耐受苯胺降解菌MS-01接觸酶反應陽性、產(chǎn)吲哚試驗陽性、產(chǎn)氨試驗陽性、甲基紅試驗反應陰性、淀粉水解陰性、乙酰甲基醇實驗陰性、硝酸鹽還原反應陰性、檸檬酸利用陽性、能利用葡萄糖、能氧化乙醇或醛糖；生長溫度范圍：30～40?℃、生長pH?值范圍：5.5～8.0。

????本發(fā)明的高耐受苯胺降解菌MS-01的16SrDNA?序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發(fā)明苯胺降解菌MC-01經(jīng)16SrDNA?測序及同源性比較，得到與其最相近的種屬是蒼白桿菌屬（Ochrobactrum），同源性達98%。結(jié)合細菌形態(tài)特征、生長條件、生理生化鑒定結(jié)果，確定高耐受苯胺降解菌MC-01為蒼白桿菌屬的一個新菌種。

二、本發(fā)明的苯胺降解菌MC-01苯胺廢水處理中的應用。

???本發(fā)明的應用具體包括如下步驟：

??（1）斜面培養(yǎng)

將實施例1獲取的苯胺降解菌MC-01接種到LB斜面培養(yǎng)基中，在35℃下培養(yǎng)24?h；

（2）種子培養(yǎng)

按步驟（1）所得的菌株接種量4%（v/v）接種于種子培養(yǎng)基中，35℃、160?rpm培養(yǎng)12h；

???（3）發(fā)酵降解

將步驟（2）培養(yǎng)后的菌液以10%的投放量到廢水中進行發(fā)酵降解，發(fā)酵降解條件如下：溫度35℃、攪拌速度600?rpm、接種量是10%（v/v）、通氣量3?vvm、溶氧15%。

????優(yōu)選的，所述的斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為牛肉膏5?g，蛋白胨10?g，NaCl?5?g，純化瓊脂18?g，蒸餾水1000?mL，苯胺300?mg。

????優(yōu)選的，所述的種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為牛肉膏5?g，蛋白胨10?g，NaCl?5?g，純化瓊脂18?g，蒸餾水1000?mL，苯胺500?mg。

????優(yōu)選的，所述步驟3）中苯胺濃度為1500mg/L以下。

???本發(fā)明的有益效果在于：

???本發(fā)明苯胺降解菌MC-01具有高濃度條件下苯胺廢水的生物降解處理功能，本菌株的可耐受廢水中苯胺的濃度達5000mg/L。實驗測試數(shù)據(jù)表明，當廢水中的苯胺濃度在1500?mg/L（COD值6000?mg/L）以下時，經(jīng)過36?h降解，在不添加任何化學試劑的情況下，該菌對苯胺降解率可達98.1%，經(jīng)過60h，該菌對含苯胺廢水的降解率基本達到99%，不造成環(huán)境二次污染，大幅度降低了廢水的處理成本，具有廣闊的應用前景。本發(fā)明苯胺降解菌MC-01對于解決高濃度條件下苯胺廢水生物處理系統(tǒng)的問題很有幫助，具有很高的應用價值。