[發明專利]一種桔小實蠅抗菌肽及其衍生物和應用

有效

• 申請號: 201410524612.0
• 申請日: 2014-10-08
• 公開（公告）號: CN104356215A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 李莉;李本濤
• 申請（專利權）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;A23K1/16
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種桔小實蠅抗菌肽及其衍生物和應用。

背景技術

昆蟲是非常龐大的生物種群之一，據估計，世界上昆蟲的種類大約有800萬，占整個動物數量的95%以上，其個體數量超過千百種，昆蟲的分布相當廣泛，幾乎所有生態環境都有昆蟲的蹤跡，這些特殊環境都表明了昆蟲本身具有極強的適應生存能力和防御外界能力，昆蟲本身的防御系統并不同于脊椎動物，其沒有完善的B淋巴系統和T淋巴系統，也沒有完善的免疫球蛋白和補體存在，大量研究結果表明，在昆蟲感染病原菌或可能導致病原菌感染的情況下，昆蟲自身都能快速合成大量的具有殺菌作用的抗菌肽，迅速殺滅已侵入機體的病原菌，并阻止病原菌的繼續侵染，此特殊的防御系統使得昆蟲抗菌肽成為人類生命科學研究領域的熱點，因此，研制高效的、新一代的，并且對人類和動物及環境都具有安全保障的抗菌制劑，已經成為當今科學研究領域的新課題。

二十世紀七十年代，瑞典科學家Boman等首先發現了以天蠶素命名的昆蟲抗菌肽，以惜古比天蠶(Hyalophora?cecropia)為實驗材料，注射蠟狀芽抱桿菌誘導其產生cecropin。據統計，目前科學研究者己經相繼從家蠅、家蠶、柞蠶、蓖麻蠶、煙草天蛾、肉蠅及多種昆蟲中分離得到200多種昆蟲抗菌肽。根據其氨基酸組成結構和生物特性，可將昆蟲抗菌肽大致分為以下四類：形成兩親性a-螺旋的線狀抗菌肽；具有二硫鍵的環狀或末端開放的抗菌肽；富含脯氨酸的抗菌肽（Proline-rich?peptides）；富含甘氨酸的抗菌肽（Glycine-rich?peptides）。

由于昆蟲種類巨大，還有很多新的昆蟲抗菌肽未被鑒定發現。桔小實蠅Bactrocera?dorsalis?Hendel?是果蔬的重要害蟲，屬雙翅目Diptera、實蠅科Trypetidae、寡毛實蠅亞科Dacinae，在廣東省目前也是導致柑橘、枇杷等果樹掛果時為害特別嚴重的害蟲之一。作為雙翅目昆蟲的桔小實蠅，在它的基因組內，理論上應該有抗菌肽基因，黨向麗等（2012）從桔小實蠅中分離出抗菌肽Bactrocerin-2，除此之外，相關研究鮮有報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種桔小實蠅抗菌肽及其衍生物。

本發明的另一目的在于提供上述桔小實蠅抗菌肽及其衍生物在制備抗菌產品中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

一種桔小實蠅抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

一種桔小實蠅抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

一種桔小實蠅抗菌肽，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示或其反向互補序列。

一種桔小實蠅抗菌肽，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示或其反向互補序列。

一種桔小實蠅抗菌肽衍生物，該衍生物為SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的具有與SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2功能相同的氨基酸序列。

一種桔小實蠅抗菌肽衍生物，該衍生物為SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列的化學修飾物。

進一步的，上述化學修飾包括乙酰化、氨基化、甲基化、磷酸化、糖基化、脂基化、泛素化、生物素標記、熒光蛋白標記。

本發明的有益效果是：

本發明提供了一種桔小實蠅抗菌肽，無溶血活性，具有生物安全性，經實驗證明，對多種細菌，如革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌具有抑菌活性，可用于抗病原微生物感染的生物技術產品研發。以桔小實蠅抗菌肽BH-AMP003氨基酸序列或基因序列為基礎，通過基因工程、蛋白質工程、發酵工程、轉基因和其它生物技術手段，可以大規模獲得桔小實蠅抗菌肽蛋白，用于抗病原微生物感染的生物技術產品研發。

本發明獲得的桔小實蠅抗菌肽BH-AMP003具有生物活性，具有抗菌作用。分離純化的桔小實蠅抗菌肽BH-AMP003對金黃色葡萄球菌的MIC為5μg/mL。因此，本發明的桔小實蠅抗菌肽BH-AMP003可應用于制備抗病菌類產品，抗病菌類產品包括飼料添加劑、獸藥、防腐劑、醫藥產品如抗菌藥物等。

附圖說明

圖1為經誘導后的桔小實蠅幼蟲cDNA文庫重組質粒的酶切鑒定電泳圖譜；

圖2為質粒載體pPIC3.5K的物理圖譜；