[發(fā)明專利]一種檢測動物源食品中甲巰咪唑殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410523551.6
• 申請日: 2014-10-08
• 公開（公告）號: CN105486869A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜道林;洪霞;劉靜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)，具體涉及一種檢測甲巰咪唑的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特別適用于動物源食品中甲巰咪唑殘留的檢測。

技術(shù)背景

甲巰咪唑是甲亢的常用治療藥物，能改變動物體內(nèi)的內(nèi)分泌，動物在飼用含甲巰咪唑的飼料后，在尿液、雞肉和組織中會有不同程度的殘留，歐盟等國家已明確將其列入動物園食品中禁用藥物。目前，激素類物質(zhì)已被大部分國家禁止在養(yǎng)殖業(yè)中使用，并不得在食品中檢出。但國內(nèi)對畜產(chǎn)品中甲巰咪唑等違禁藥物殘留的檢測幾乎是空白，根據(jù)我國對動物源產(chǎn)品殘留監(jiān)控規(guī)定及有關(guān)進口國的要求，研究各種檢測方法已成為當務(wù)之急。

目前，檢測甲巰咪唑殘留量的方法主要是高效液相色譜法(HPLC)，由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程以及對檢驗人員的高技能要求，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本的篩查。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對上述不足提供一種用于動物源食品中甲巰咪唑殘留檢測酶聯(lián)免疫試劑盒，其操作簡單適合現(xiàn)場大批量樣品的篩選。

本發(fā)明試劑盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶標板(包被原為抗原、抗體或抗抗體)；

(2)酶標記物(為酶標記半抗原、酶標記抗體或酶標記抗抗體)；

(3)甲巰咪唑抗體工作液(當酶標板上包被抗原且酶標記物為酶標記抗抗體或酶標板上包被抗抗體且酶標記物為酶標抗原時含有)；

(4)甲巰咪唑標準品溶液；

(5)底物顯色液；

(6)終止液；

(7)濃縮洗滌液；

(8)濃縮復(fù)溶液；

本發(fā)明提供的檢測甲巰咪唑殘留量的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括甲巰咪唑特異性抗體工作液及預(yù)包被包被原的酶標板和酶標記物工作液，所述酶標記物為酶標記的抗抗體，酶標記甲巰咪唑半抗原或酶標記甲巰咪唑特異性抗體；所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體。

所述酶標記物的標記酶為辣根過氧化物酶，酶標記的羊抗鼠抗抗體是采用混合酸酐或碳化二亞胺法將標記酶與抗抗體進行偶聯(lián)得到的。

所述甲巰咪唑特異性抗體為甲巰咪唑單克隆抗體，他們均是用甲巰咪唑半抗原與載體蛋白采用混合酸酐法得到的偶聯(lián)物作為免疫原得到的，所述甲巰咪唑單克隆抗體優(yōu)選甲巰咪唑鼠單克隆抗體。

為了更方便現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查，所述試劑盒還包括甲巰咪唑標準品溶液、顯色劑、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。

所述洗滌液優(yōu)選濃縮洗滌液為pH7.1~17.7，含有0.8%~1.2%吐溫80和0.03~10.05%硫柳汞防腐劑，0.02~10.04mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比。

當酶標記物的標記酶為辣根過氧化物酶，底物顯色液A為過氧化氫或過氧化脲，底物顯色液B為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，終止液為1~2mol/L硫酸或鹽酸緩沖液；

所述復(fù)溶液為含有0.08~10.12%吐溫20、3~18%卵清蛋白、0.2~0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比。

本發(fā)明中酶標板的制備過程為用緩沖液將包被原稀釋成0.2~0.3μg/ml，每孔加入100μL，37℃溫育2h或4℃過夜，傾去包被液，用稀釋后的洗滌液洗滌兩次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150~200μL封閉液，37℃溫育1~2h，傾去孔內(nèi)液體拍干，干燥后用鋁膜真空密封保存。

本發(fā)明中抗原的合成過程：

1.半抗原的合成

甲巰咪唑半抗原是將孕酮和琥珀酸酐通過反應(yīng)得到的

2.甲巰咪唑抗體的制備

將甲巰咪唑半抗原與載體蛋白采用碳化二亞胺法進行偶聯(lián)得到免疫原

本發(fā)明所述試劑盒中甲巰咪唑標準品溶液；標注品溶液6瓶，為0μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L，24.3μg/L。

本發(fā)明的檢測原理為：

當在微孔條上預(yù)包被甲巰咪唑抗原時，加入樣本溶液或標準品溶液后，隨即加入酶標二抗，再加入甲巰咪唑特異性抗體溶液，樣本中殘留的甲巰咪唑與酶標板上包被的甲巰咪唑抗原競爭孕酮特異性抗體，酶標記抗抗體進行放大作用，用顯色液顯色，樣本吸光值與甲巰咪唑的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較可粗略判斷樣品中甲巰咪唑殘留量的濃度范圍。

本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測動物源食品中甲巰咪唑殘留的方法，它包括步驟：

(1)樣品前處理；

(2)用試劑盒進行檢測；

(3)分析檢測結(jié)果。