[發明專利]以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法有效
| 申請號： | 201410522163.6 | 申請日： | 2014-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN104357526B | 公開（公告）日： | 2018-05-18 |
| 發明（設計）人： | 路福平;毛淑紅;于璐;吉少嫻;張會圖;劉曉光 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12P33/02 | 分類號： | C12P33/02 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 趙瑤瑤 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 低共熔物 作為 溶劑 利用 細胞 轉化 制備 膽甾烯酮 方法 | ||
1.以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：步驟如下：
⑴靜息細胞在發酵培養基中培養好以后，離心，加入無菌磷酸緩沖液重懸作為轉化液；所述靜息細胞具有將膽固醇氧化生成膽甾烯酮的能力；
⑵在轉化液中投入膽固醇，并添加低共熔物為促溶劑，乙酸乙酯萃取轉化液，采用HPLC法檢測產物膽甾-4-烯-3-酮的產率；
⑶用柱層析分離法將底物膽固醇與產物膽甾烯酮進行分離，并純化得到膽甾烯酮純品；
所述靜息細胞為簡單節桿菌(Arthrobactersimplex)；所述低共熔物為氯化膽堿/乙二醇混合摩爾比為1:2、1:1、2:1中的一種，或氯化膽堿/甘油混合摩爾比為1:2、1:1、2:1中的一種，或氯化膽堿/尿素混合摩爾比為1:2、1:1、2:1中的一種。
2.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述簡單節桿菌的斜面培養基為g/L：葡萄糖8～10，玉米漿8～9，蛋白胨4～5，KH
3.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述簡單節桿菌的培養方法為將簡單節桿菌刮一環到無菌水中，振蕩混勻，按照OD為0.440～0.520的濃度算好比例加入到50ml/250ml搖瓶中進行反應，菌種發酵培養時間為18h～22h，溫度為25℃～35℃，搖床轉速為150rpm～200rpm。
4.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述無菌磷酸緩沖液的pH為7.0～7.2。
5.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：加入無菌磷酸緩沖液重懸后的轉化液其菌體濃度為0.35～0.45g
6.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述低共熔物的添加濃度為1％～5％。
7.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述底物膽固醇的投料后，采用轉化溫度為25℃～35℃，搖床轉速為150rpm～200rpm，反應時間為48～72h的方式進行微生物轉化培養。
8.根據權利要求1所述以低共熔物作為促溶劑利用靜息細胞轉化制備膽甾烯酮的方法，其特征在于：所述柱層析分離法分離底物產物，采用石油醚：乙酸乙酯＝10：1(V：V)的比例進行分離，將收集得到的液體采用減壓旋蒸法進行產物的純化收集。
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