[發明專利]一種獲得抗白粉病小麥的方法有效
| 申請號： | 201410520075.2 | 申請日： | 2014-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN104789588B | 公開（公告）日： | 2018-02-13 |
| 發明（設計）人： | 高彩霞;王延鵬;邱金龍 | 申請（專利權）人： | 中國科學院遺傳與發育生物學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/62;C12N15/29;C07K14/415;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100101 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 獲得 白粉病 小麥 方法 | ||
1.一種獲得抗白粉病小麥的方法，包括如下步驟：敲除出發小麥中的MLO基因，得到抗白粉病小麥；
所述“敲除出發小麥中的MLO基因”是通過在所述MLO基因上進行定點敲除實現的；
所述定點敲除是借助TAL-MLO-L蛋白和TAL-MLO-R蛋白實現的；所述TAL-MLO-L蛋白包括兩個功能區段，即與靶序列上游部分核苷酸特異結合的TAL-L片段和EL突變型Fok I核酸內切酶；所述TAL-MLO-R蛋白包括兩個功能區段，即與靶序列下游部分核苷酸特異結合的TAL-R片段和KK突變型Fok I核酸內切酶；
所述TAL-L片段如序列表的序列12自N末端第138-681位氨基酸殘基所示；所述EL突變型Fok I核酸內切酶如序列表的序列12自N末端第733-933位氨基酸殘基所示；所述TAL-R片段如序列表的序列12自N末端第1130-1707位氨基酸殘基所示；所述KK突變型Fok I核酸內切酶如序列表的序列12自N末端第1759-1954位氨基酸殘基所示。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述抗白粉病小麥為所述MLO基因被敲除的純合株。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述MLO基因為TaMLO-A1基因、TaMLO-B1基因和TaMLO-D1基因；
所述TaMLO-A1基因編碼序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質；
所述TaMLO-B1基因編碼序列表中序列5所示的氨基酸序列組成的蛋白質；
所述TaMLO-D1基因編碼序列表中序列6所示的氨基酸序列組成的蛋白質。
4.一種融合基因，包括區段甲和區段乙；所述區段甲自上游至下游依次包括如下元件：N端片段的編碼區、TAL-L片段的編碼區、C端片段的編碼區和EL突變型Fok I核酸內切酶的編碼區；所述區段乙自上游至下游依次包括如下元件：所述N端片段的編碼區、TAL-R片段的編碼區、所述C端片段的編碼區和KK突變型Fok I核酸內切酶的編碼區；所述區段甲和所述區段乙之間具有T2A片段；
所述TAL-L片段如序列表的序列12自N末端第138-681位氨基酸殘基所示；所述EL突變型Fok I核酸內切酶如序列表的序列12自N末端第733-933位氨基酸殘基所示；所述TAL-R片段如序列表的序列12自N末端第1130-1707位氨基酸殘基所示；所述KK突變型Fok I核酸內切酶如序列表的序列12自N末端第1759-1954位氨基酸殘基所示；所述N端片段如序列表的序列12自N末端第1-136位氨基酸殘基所示；所述C端片段如序列表的序列12自N末端第684-730位氨基酸殘基所示；所述T2A片段如序列表的序列12自N末端第934-951位氨基酸殘基所示。
5.含有權利要求4所述融合基因的重組載體。
6.用于敲除出發小麥中的MLO基因的物質在制作抗白粉病小麥中的應用；所述物質為權利要求4所述的融合基因或權利要求5所述的重組載體。
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