[發明專利]甲基對硫磷膠體金檢測卡

在審

• 申請號: 201410519593.2
• 申請日: 2014-10-07
• 公開（公告）號: CN105572357A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 杜道林;洪霞;吳明慧
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是甲基對硫磷試紙檢測方法。

背景技術

甲基對硫磷（英文名：parathion-methyl）俗稱甲基1605，學名O,O-二甲基-O-(4－硝基苯基)硫代磷酸酯，一種有機磷殺蟲劑。工業產品為帶蒜臭的黃棕色油狀液體，純品為白色結晶，熔點36～36.5℃，難溶于水，易溶于有機溶劑，加熱會異構化，高溫或遇堿易分解。甲基對硫磷能通過食道、呼吸道和皮膚引起中毒。屬高毒級農藥。

甲基對硫磷具觸殺和胃毒作用，能抑制害蟲神經系統中膽堿酯酶的活力而致死，殺蟲譜廣，常加工成乳油或粉劑使用，主要用途是防治多種農業害蟲，由于毒性高，要嚴格按規定施藥，并加強安全防護措施。短期內接觸(口服、吸入、皮膚、粘膜)大量接觸引起急性中毒。表現有頭痛、頭昏、食欲減退、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、流涎、瞳孔縮小、呼吸道分泌物增多、多汗、肌束震顫等。重者出現肺水腫、腦水腫、昏迷、呼吸麻痹。部分病例可有心、肝、腎損害。少數嚴重病例在意識恢復后數周或數朋發生周圍神經病。個別嚴重病例可發生遲發性猝死。

我國已制定的一些農副產品中的農藥最高殘留限量表中甲基對硫磷的限量為0.1mg/kg。

發明內容

本發明目的在于提供快速檢測出食品中甲基對硫磷的殘留。

本發明的技術方案是甲基對硫磷的檢測卡及其檢測樣品的處理方法。甲基對硫磷的檢測卡是在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼內設置檢測條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條是由支承背板上粘貼四種原件組成：支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端上粘貼吸水紙，另一端粘貼樣品墊，吸水紙內端與硝酸纖維素膜搭接，樣品墊與硝酸纖維素膜之間則有一段金標墊，由金標墊將樣品墊與硝酸纖維素膜連接在一起。金標墊中是含有第二種屬蛋白和甲基對硫磷抗體的混合物，硝酸纖維素膜上橫向有2條間隔開的顯色印記帶，一條是含甲基對硫磷蛋白質偶聯物的檢測帶，另一條是第二種屬動物蛋白的IgG（常用的為抗兔抗體或抗鼠抗體）；測試條置入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。

樣品處理方法是：稱取試樣2±0.05g于50mL的離心管中，加入10mL超純水，在1800r/min條件下用高速組織粉碎機打碎（約1min），取粘稠液加50%三氯乙酸2mL和二氯甲烷10mL，在回旋式振蕩器上高速振搖30min。然后在4℃5000rpm條件下離心30min，取上清10mL，加二氯甲烷2mL，在回旋加速器上振蕩混合20min，再在4℃12000rpm條件下離心30min，上清液即為藥物的抽提液。

本發明的優點是能快速檢測出樣品中含有的甲基對硫磷，且節省檢測成本，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結果準確。

附圖說明

圖1是甲基對硫磷檢測卡外殼及檢測試紙條在外殼內的安置圖。

圖2是甲基對硫磷檢測卡檢測試紙條結構示意圖。

圖3是檢測試紙條硝酸纖維素膜上顯示印跡帶示意圖。

具體實施方式

1.標記膠體金的制備

膠體金溶液的制備：先將1g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100mL超純水配置成1%的氯金酸溶液；再取1L超純水于特質電爐上加熱，至沸騰后加入10mL1%的檸檬酸三鈉水溶液，沸騰后繼續加熱，5分鐘后加10mL1%的氯金酸溶液，再次加熱至沸騰，等待顏色變為酒紅色后開始計時，10分鐘后停止加熱，取下后自然冷卻、定容至1L，即為膠體金溶液。

抗體標記：確定抗體所需的0.1mol/lK₂CO₃的比例，取100mL膠體金溶液，加入此比例0.1mol/L的K₂CO₃，混勻（約5min），再將甲基對硫磷和第二種屬動物蛋白分別用PBS（0.01mo1/L，pH7.4）溶解稀釋至2mg/mL，加入2mL2mg/mL的甲基對硫磷抗體（或2mL2mg/mL第二種屬動物蛋白），混勻（5min），最后加入10%BSA2mL，混勻（5min）。離心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即為金標甲基對硫磷抗體。

膠體金標記部分處理：將甲基對硫磷抗體稀釋后，按一定比例將載體（如玻璃纖維、聚酯膜等）浸透，鋪均勻，取出放于37℃恒溫烘箱烘制8-12h，干燥后即作為膠體金標記部分。

2.免疫層析專用高分子復合膜制備