[發明專利]翹嘴紅鲌精液冷凍保存液

有效

• 申請號: 201410519441.2
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN104304236A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 采克俊;曹訪;朱俊杰;李景芬;葉金云
• 申請（專利權）人: 采克俊
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 袁彩君

技術領域

本發明涉及一種翹嘴紅鲌精液冷凍保存液，屬于水產養殖技術領域。?

背景技術

精子在液氮超低溫(-196℃)條件下細胞的代謝基本停止，處于假死狀態，可以長期保存。魚類精子的低溫冷凍保存對于魚類繁殖育種、資源保護和遺傳改良都具有重要意義。一些魚類物種特異的精子冷凍方案已經建立。魚類精子冷凍首先要將精液稀釋于冷凍保存液中，平衡一段時間后再進行降溫冷凍。冷凍保存液除了無機鹽(如NaCl、KCl、NaHCO₃、KHCO₃和檸檬酸鈉等)和滲透性防凍劑之外，往往還會添加一些非滲透性抗凍劑。非滲透性抗凍劑是一類不能透過細胞膜的大分子物質，主要有糖類，如葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉籽塘、麥芽糖等；脂類，如磷脂、膽固醇等；蛋白質類，如卵黃、脫脂奶粉、小牛血清、抗凍蛋白等，以及其他添加劑，如氨基酸、抗生素、抗氧化劑等。冷凍保存液的成分到目前為止仍然沒有一個統一的定論，一般認為應根據不同魚類精子特性進行逐個試驗篩選。而不同的非滲透性抗凍劑及不同使用濃度，對不同物種精子冷凍保存，具有不同的作用。?

翹嘴紅鲌是我國淡水水域常見的一種大型淡水經濟魚類。其肉潔白鮮嫩，營養價值較高，是肉食性名貴魚類，具有很高的經濟價值和生態價值。有關翹嘴紅鲌精子冷凍保存過程中各個環節的研究在國內外未見報道，本發明涉及的翹嘴紅鲌精液冷凍保存液也是無意中的發現，從而完善了翹嘴紅鲌的精子冷凍保存方案，具有實際應用和推廣價值。?

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種可以降低冷凍對精子的損傷同時可以提高凍精活率的翹嘴紅鲌精液冷凍保存液。?

本發明解決所述技術問題的方案是：一種翹嘴紅鲌精液冷凍保存液，所述冷凍保存液中含有海藻糖和谷氨酰胺。?

作為進一步的技術方案，所述的冷凍保存液以稀釋液為基質，每1000mL冷凍保存液中含有34.23g海藻糖和2.9g谷氨酰胺。?

作為進一步的技術方案，所述冷凍保存液中，含有8％(體積百分數)乙二醇。?

作為進一步的技術方案，所述的稀釋液為HBSS稀釋液。?

作為進一步的技術方案，所述稀釋液的組成為，?

每1000mL稀釋液中含有?

本發明的有益效果：采用本發明所述的冷凍保存液，翹嘴紅鲌精液解凍后，精子的活率在70％以上，經過冷凍保存及復蘇后的凍精人工授精得到的受精卵與鮮精人工授精得到的受精卵相比，平均孵化率無顯著差異。?

具體實施方式

實施例1?

一、配制含海藻糖和谷氨酰胺的翹嘴紅鲌精液冷凍保存液?

配制稀釋液：準確稱取氯化鈉7.896g、氯化鉀0.396g、七水合硫酸鎂0.195g、十二水合磷酸氫二鈉0.072g、磷酸二氫鉀0.054g、碳酸氫鈉0.345g3、葡萄糖0.99g溶于1000mL蒸餾水中，充分混勻，分裝至離心管中，放到冰箱里冷凍備用。?

配制冷凍保存液：在配制好的HBSS稀釋液中加入防凍液乙二醇至終濃度為8％(體積百分數)，海藻糖和谷氨酰胺的終濃度分別為34.23g/L和2.9g/L。即翹嘴紅鲌精液冷凍保存液每1000mL組成如下：?

乙二醇????80mL?

海藻糖????34.23g?

谷氨酰胺??2.9g?

適用于翹嘴紅鲌精液冷凍保存液的稀釋液即HBSS稀釋液補足至1000mL。?

為說明該冷凍保存液的效果，配置3種用于對比的冷凍保存液。?

第一種對比的冷凍保存液每1000mL組成如下：?

乙二醇??80mL?

第二種對比的冷凍保存液每1000mL組成如下：?

乙二醇??80mL?

海藻糖??34.23g?

第三種對比的冷凍保存液每1000mL組成如下：?

乙二醇????80mL?

谷氨酰胺????2.9g?

二、獲取可用的精液?

選取性成熟的雄性翹嘴紅鲌親魚，輕壓腹部使白色精液流出，精液采集后應立即放在4℃冰箱內，防止精子活力下降，同時對采集的多管精液進行精子活力鑒定，具體步驟為在載玻片上滴10μl純水，取5μl鮮精于純水中，立即用顯微鏡觀察其活力，精子活力在90％以上的精液用于精子冷凍。?

三、精液的冷凍?