[發(fā)明專(zhuān)利]一種肺癌TUBB3基因的檢測(cè)試劑盒及探針

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410514951.0
• 申請(qǐng)日: 2014-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104278096A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 繆為民
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津蒙特立醫(yī)療科技有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津?yàn)I?？凭曋R(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 韓敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病相關(guān)基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種肺癌TUBB3基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒。

背景技術(shù)

肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長(zhǎng)期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關(guān)系。

根據(jù)肺癌的生長(zhǎng)、侵犯及轉(zhuǎn)移速度和范圍以及對(duì)化療藥物和放射治療的敏感性，臨床將肺癌分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)及非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，后者占肺癌發(fā)病率80％左右。只有合理應(yīng)用手術(shù)、放療、化療、靶向治療等方法，才能獲得較好控制率，延長(zhǎng)生存期。

在過(guò)去的幾十年里，雖然科學(xué)家們不斷地探索非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)化療和放療的方法，但取得的成果仍不能令人滿(mǎn)意，例如晚期肺癌患者的平均生存時(shí)間仍未超過(guò)一年，療效不確定，部分患者會(huì)出現(xiàn)一些毒副反應(yīng)，如惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)，影響了生活質(zhì)量，甚至中斷治療。傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性化學(xué)藥物可比作是“殺敵一千，自損八百”，因而許多患者對(duì)此是談之色變，而靶向治療正是科學(xué)家們幾十年來(lái)致力于分辨癌細(xì)胞與正常細(xì)胞之間分子生物學(xué)差異的臨床研究成果。

所謂靶向治療，就是通過(guò)基因或分子的選擇，有針對(duì)性地殺死惡性腫瘤細(xì)胞，而幾乎不影響正常細(xì)胞。這一劃時(shí)代的生物腫瘤療法的特點(diǎn)可以總結(jié)為4個(gè)字：“高效低毒”。一方面，靶向治療大大提高了腫瘤治療的療效；另一方面，靶向治療減少患者在治療中的副作用，提高生活質(zhì)量。

靶向治療是指在分子生物學(xué)診斷的基礎(chǔ)上，利用肺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞之間存在的差異，有針對(duì)性地抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，例如，采用拮抗受體、抑制腫瘤生長(zhǎng)所需的血管和阻斷腫瘤生長(zhǎng)的信號(hào)傳導(dǎo)通路等方法來(lái)抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，從而達(dá)到治療目的。

原癌基因(proto-oncogene)是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，是維持機(jī)體正常生命活動(dòng)所必須的，在進(jìn)化上高度保守。當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時(shí)，使細(xì)胞過(guò)度增殖，從而形成腫瘤。TUBB3是一種和肺癌發(fā)病密切相關(guān)的位于人類(lèi)16號(hào)染色體(16q24.3)的原癌基因。TUBB3基因的擴(kuò)增，對(duì)于肺癌的靶向治療具有重要指導(dǎo)意義。

目前，市場(chǎng)上檢測(cè)TUBB3基因擴(kuò)增主要用PCR方法，由于檢測(cè)的是腫瘤和正常細(xì)胞的混合物，因此結(jié)果不夠準(zhǔn)確，而市場(chǎng)上亦迫切需要一種更為準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問(wèn)題與不足，提供一種肺癌TUBB3基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法，探針及試劑盒。該法設(shè)計(jì)周全，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性高，可以快速，準(zhǔn)確，直觀(guān)地測(cè)出肺癌TUBB3基因的擴(kuò)增，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師對(duì)肺癌進(jìn)行分子病理分型的參考依據(jù)，適用于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種肺癌相關(guān)TUBB3基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)的一組雙色FISH探針，所述一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的TUBB3基因探針(2)標(biāo)記為綠色的16號(hào)染色體中心粒探針。其中TUBB3：Entrez?Gene?ID:10381。

本發(fā)明還提供了一種肺癌相關(guān)TUBB3基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)試劑盒，包括一組雙色FISH探針，所述一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的TUBB3基因探針(2)標(biāo)記為綠色的16號(hào)染色體中心粒探針。其中TUBB3：Entrez?Gene?ID:10381。。

本發(fā)明還提供了一種肺癌TUBB3基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法，包括如下步驟：對(duì)肺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用一組雙色探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述肺癌相關(guān)基因的擴(kuò)增；所述一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的TUBB3基因探針(2)標(biāo)記為綠色的16號(hào)染色體中心粒探針；其中TUBB3：Entrez?Gene?ID:10381。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明的肺癌TUBB3基因擴(kuò)增FISH檢測(cè)方法通過(guò)對(duì)肺癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理，然后采用一組雙色探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述肺癌相關(guān)基因的擴(kuò)增狀態(tài)。本法設(shè)計(jì)周全，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性高，可以快速，準(zhǔn)確，直觀(guān)地檢測(cè)出肺癌相關(guān)TUBB3基因的擴(kuò)增狀態(tài)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師對(duì)肺癌進(jìn)行精確分子病理分型的參考依據(jù)，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式