[發明專利]檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片以及試劑盒

在審

• 申請號: 201410513328.3
• 申請日: 2014-09-29
• 公開（公告）號: CN104232800A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 文心田;曹三杰;黃小波;鄧靜;文翼平;伍銳;姜來生;尹人杰;趙松;常曉霞
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C40B40/06;C12R1/93
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及一種檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片以及試劑盒。

背景技術

多病原混合感染是當前豬場疫病的普遍現象，豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬流行性乙型腦炎這三種豬病毒引起的疾病癥狀相似且常常呈混合感染,是當前危害養豬業的3種重要病毒性疾病，因此早期鑒別診斷并及時了解流行狀況對控制這3種病的流行顯得尤其重要。目前對這3種病的診斷多采用病原的分離及常規的血清學方法，但需時間較長。最近國外和國內均建立了病原的分離鑒定、免疫膠體金技術、酶聯免疫吸附試驗、血清中和實驗、聚合酶鏈反應等，但是還不能更加快速的檢測多種病原的混合感染。

基因芯片技術是近年來新興起的一種生物高新技術，該技術可以同時定量或定性的檢測成千上萬個基因信息，具有無選擇性、客觀、高通量的特點。基因芯片計劃開展后,許多部門、大學、重點實驗室及制藥公司參與了該項目的研發,我國相繼也成立了一大批基因芯片公司。隨著基因組數據的增長以及分子生物學相關學科的快速發展,基因芯片技術得到迅猛發展和廣泛應用。但生物芯片技術發展時間較短，很多技術還處于初級研發階段，要成為實驗室研究或臨床可以普遍采用的技術仍有諸多關鍵問題亟待解決。(1)基因芯片的特異性的提高；(2)增加信號檢測的靈敏度；(3)簡化樣品制備和標記操作；(4)設備與操作人員的要求較高；(5)應用標準的統一。

目前，昊時友等，“豬病毒性繁殖障礙綜合征基因芯片診斷方法的建立”，中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會第十二次學術研討會，2007年公開了檢測日本乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒等6種病毒的基因芯片，但是該文件中沒有芯片靈敏度試驗，不能說明其可以靈敏地檢出乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的特異性強、靈敏度高的可同時檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片和試劑盒。

本發明檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片，它包括固相載體以及固定在固相載體上的探針；所述探針包括SEQ?ID?NO：1或2所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段，SEQ?ID?NO：3或4所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段，以及SEQ?ID?NO：5或6所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段。

基因芯片，是指指通過不同方法將生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic?DNA、多肽、抗體、抗原等)固著于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝膠、尼龍膜等固相遞質上形成的生物分子點陣，其突出的特點是微型化、集成化、平行化和高通量。

優選地，它還包括定位探針，定位探針是SEQ?ID?NO：19所示的基因片段。

本發明檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的試劑盒，它包括前述的基因芯片與擴增豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因的試劑，其中，擴增豬流行性乙型腦炎病毒的試劑包括SEQ?ID?NO：7～8和/或SEQ?ID?NO：9～10所示引物對；擴增豬瘟病毒基因的試劑包括SEQ?ID?NO：11～12和/或SEQ?ID?NO：13～14所示引物對；擴增豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因的試劑包括SEQ?IDNO：15～16和/或SEQ?ID?NO：17～18所示引物對。

優選地，所述引物對中，SEQ?ID?NO：7、9、11、13、15、17所示上游引物與SEQ?ID?NO：8、10、12、14、16、18所示下游引物的摩爾比分別為50:1、40:1、80:1、80:1、20:1、10:1。

SEQ?ID?NO：7～8、SEQ?ID?NO：9～10、SEQ?ID?NO：11～12、SEQ?ID?NO：13～14、SEQ?ID?NO：15～16和SEQ?ID?NO：17～18所示引物對以及SEQ?ID?NO：1～6所示寡核苷酸片段。

SEQ?ID?NO：1或2所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段，SEQ?ID?NO：3或4所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段，以及SEQ?ID?NO：5或6所示任意一個或者兩個寡核苷酸片段在制備檢測豬流行性乙型腦炎病毒、豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片中的用途。優選地，它還包括定位探針，定位探針是SEQ?ID?NO：19所示的基因片段。