[發(fā)明專利]一種去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410510450.5
• 申請(qǐng)日: 2014-09-28
• 公開（公告）號(hào): CN104278076A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉振宇;李鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島康和食品有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/10
• 分類號(hào): C12Q1/10
• 代理公司: 北京市百倫律師事務(wù)所 11433
• 代理人: 姜瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

世界上微生物間的多樣化和變異性及物種生境的生態(tài)復(fù)雜性，帶來了探討、了解微生物的廣泛性、復(fù)雜性和長(zhǎng)久性。微生物的一個(gè)物種就是一個(gè)獨(dú)特的基因庫(kù)，微生物的新陳代謝是錯(cuò)綜復(fù)雜的生命活動(dòng)，在長(zhǎng)期的生物進(jìn)化中，形成了一套完整統(tǒng)一的靈敏調(diào)節(jié)系統(tǒng)，依靠這種調(diào)節(jié)系統(tǒng)，嚴(yán)格控制各種代謝活動(dòng)。有條不紊協(xié)調(diào)進(jìn)行并靈活適應(yīng)環(huán)境。不同培養(yǎng)基，因培養(yǎng)基配方不同，影響其生長(zhǎng)和變異情況。

培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基)，較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3～6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。

培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

目前還不能完全從生化反應(yīng)的基本原理來推斷和計(jì)算出適合某一菌種的培養(yǎng)基配方，只能用生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)等的基本理論，參照前人所使用的較適合某一類菌種的經(jīng)驗(yàn)配方，再結(jié)合所用菌種和產(chǎn)品的特性，采用搖瓶、玻璃罐等小型發(fā)酵設(shè)備，按照一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)方法選擇出較為適合的培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基設(shè)計(jì)的基本步驟是：

根據(jù)前人的經(jīng)驗(yàn)和培養(yǎng)基成分確定時(shí)一些必須考慮的問題，初步確定可能的培養(yǎng)基成分

通過單因子實(shí)驗(yàn)最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分

當(dāng)培養(yǎng)基成分確定后，剩下的問題就是各成分最適的濃度，由于培養(yǎng)基成分很多，為減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)常采用一些合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。這些實(shí)驗(yàn)往往基于多因子實(shí)驗(yàn)，包含均勻設(shè)計(jì)、正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、響應(yīng)面分析等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對(duì)不同的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑等諸類營(yíng)養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對(duì)培養(yǎng)基的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了本發(fā)明的培養(yǎng)基。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、2.0g/L去氧膽酸鹽、1.0g/L檸檬酸鈉、0.065g/L中性紅、1.0g/L檸檬酸鐵、15.0g/L瓊脂，pH值為7.2-7.4；

在以上方案的基礎(chǔ)上，所述EC肉湯為每升EC肉湯中含有胰蛋白胨20.0g、乳糖10.0g、磷酸二氫鉀2.0g、氯化鈉5.0g、磷酸氫二鉀4.0g，其余為蒸餾水。

本發(fā)明還公開了去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于大腸菌群固體平板測(cè)定。

稱取本品43.0g，加入1000ml蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌，煮沸1分鐘。冷卻至45-50℃左右時(shí)，傾入無菌平皿，無需高壓滅菌。

本發(fā)明的有益效果：

1、培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；

2、菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；

3、便于觀察，分析。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

一種去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、2.0g/L去氧膽酸鹽、1.0g/L檸檬酸鈉、0.065g/L中性紅、1.0g/L檸檬酸鐵、15.0g/L瓊脂，pH值為7.2-7.4；

所述EC肉湯為每升EC肉湯中含有胰蛋白胨20.0g、乳糖10.0g、磷酸二氫鉀2.0g、氯化鈉5.0g、磷酸氫二鉀4.0g，其余為蒸餾水。

稱取本品43.0g，加入1000ml蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌，煮沸1分鐘。冷卻至45-50℃左右時(shí)，傾入無菌平皿，無需高壓滅菌。

在36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)