[發明專利]鏈霉菌菌株及其防治辣椒立枯病聯合應用

有效

• 申請號: 201410509421.7
• 申請日: 2014-09-29
• 公開（公告）號: CN104293710B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 馬正;俞曉平;羅帥;路丹丹;邊亞琳;許益鵬;王正亮;申屠旭萍
• 申請（專利權）人: 中國計量學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;A01P1/00;C12P1/06;C12R1/47;C12R1/54
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，涉及兩株生防放線菌—白色鏈霉菌2013和弗氏鏈霉菌M931代謝產物在防治辣椒立枯病中的應用。?

技術背景

辣椒(?Capsicum?annuum?L.)?是人們喜愛的蔬菜和調味品之一，在蔬菜生產中占有重要地位。由立枯絲核菌(Rhizoctonia?solani)引起的辣椒立枯病是辣椒育苗前期引起死苗倒苗的重要病害，多在辣椒子葉期發生，引起幼苗靠地面處莖基腐爛縊縮、猝倒死亡，苗床土壤濕度大時，病害發展迅速，可致大量幼苗死近年來辣椒立枯病的發生逐年加重，給辣椒生產造成嚴重威脅。多年來，以化學防治為主的措施不但未能遏制病害上升的趨勢，而且還抑制了土壤中的有益微生物，導致病原菌產生抗藥性和再猖獗,?同時造成有害物質殘留。因此，尋找生防菌資源，探索控制辣椒病害的生物防治途徑，對農業可持續發展具有重大意義。?

因此，生物防治引起人們的重視。目前有研究表明植物提取物中的活性成分對有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步驟多，效率低；已報道采用哈茨木霉、沙雷氏菌等。放線菌因其易產生抗病原菌成分等活性物質，已成為生物防治的主要資源和生物農藥開發的主要來源。土壤是放線菌棲居的重要場所，從土壤中獲得具有高效抗菌活性的放線菌是目前世界范圍內研制開發新醫藥和新農藥必不可少的基礎工作。國內外在生物防治辣椒立枯病方面已報道有抑制作用的大多為真菌和細菌，如哈茨木霉和沙雷氏菌，從土壤中篩選拮抗放線菌對辣椒立枯病原真菌的生物防治報道還并不多見。?

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于通過篩選提供對辣椒立枯病原菌具有較強拮抗作用的兩株生防菌—白色鏈霉菌2013和弗氏鏈霉菌M931。?

本發明的第二個目的是通過不同的比例混合兩株生防鏈霉菌的發酵產物，提供上述白色鏈霉菌和弗氏鏈霉菌在辣椒立枯病防治中的聯合應用。?

本發明的目的是通過以下技術手段得以實現：?

本發明首先以在浙江西溪濕地植物根際采集的土樣為研究對象，經分離、發酵培養、發酵液提取以及對植物病原真菌抑制活性檢測等步驟獲得兩株對辣椒立枯病原菌具有較強抑菌活性的鏈霉菌；其中一株經微生物分類學鑒定并命名為白色鏈霉菌（Streptomyces?albus）2013。該菌已于2013年6月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?NO:?M?2013269；另一株經微生物分類學鑒定并命名為弗氏鏈霉菌（Streptomyces?fradiae）M931，該菌已于2013年12月25日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:?M?2013712。中國典型培養物保藏中心地址：武漢市武昌珞珈山，郵編：430072。

本發明所述的白色鏈霉菌（Streptomyces?albus）2013在PDA固體培養基上培養時氣絲白色，基絲地衣狀，乳脂色。顯微觀察發現Streptomyces?albus?2013孢子絲螺旋形，孢子球形至卵圓形，表面光滑。本發明所述的Streptomyces?albus?2013，發酵液經提取濃縮后可對辣椒立枯病原菌具有較強的抑制作用。?

本發明所述的弗氏鏈霉菌（Streptomyces?fradiae）M931在PDA固體培養基上培養時氣絲白色，基絲淺黃色。顯微觀察發現Streptomyces?fradiae?M931孢子絲柔曲，?孢子橢圓形，表面光滑。本發明所述的Streptomyces?fradiae?M931，發酵液經提取濃縮后可對辣椒立枯病原菌具有較強的抑制作用。?

所述的辣椒立枯病原菌拮抗放線菌的篩選和抑菌活性檢測過程如下所述：?

(1)?從野外（浙江省西溪濕地植物根際）采集土樣，并進行晾干處理；

(2)?從土樣中分離放線菌，并利用辣椒立枯病原菌作為指示菌篩選具有拮抗作用的放線菌；

(3)?將長出的放線菌分別點種于混有辣椒立枯病原菌孢子懸液（1×10⁶?cfu·mL^-1）的PDA平板上，通過觀察抑菌圈大小，挑選抑菌圈較明顯的菌株進入復篩；

(4)?將選取的菌株進行發酵培養，發酵結束后離心收集發酵液，用乙酸乙酯萃取，真空減壓濃縮后制備浸膏，用于辣椒立枯病的防效檢測，由此篩選出防治效果較好的兩株拮抗微生物—白色鏈霉菌2013和弗氏鏈霉菌M931。

本發明的有益效果：?