[發明專利]胰島素淀粉樣多肽抑制劑及其制備方法、應用

有效

• 申請號: 201410509099.8
• 申請日: 2014-09-28
• 公開（公告）號: CN104327163B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 劉旭;劉強;孟春平
• 申請（專利權）人: 劉旭
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/10;A61P3/10;A61P27/02;A61P25/00;A61P9/12;A61P13/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及藥物領域，具體涉及用于治療糖尿病的多肽化合物。

背景技術

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，是由于胰島素不足或胰島素的細胞代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質及脂質代謝紊亂的一種綜合癥。近年來，糖尿病患者的人數逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數占糖尿病總人數的85-90％，嚴重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引起很多并發癥，例如：糖尿病腎病、視網膜病變、高血壓等。

近期的研究表明在2型糖尿病的病發過程中，不斷增長的β-細胞凋亡是導致β-細胞衰退和高血糖癥發生的主要原因。目前，大多數患者通過口服降糖藥物來幫助控制體內血糖，但是卻無法提高β-細胞的活性，促進胰島素的分泌，很多患者最終仍然要使用胰島素治療。

胰島淀粉樣變性與糖尿病之間存在聯系。胰島淀粉樣多肽的纖維絲形成會通過細胞凋亡導致β-細胞死亡，淀粉樣沉積可能直接會殺死細胞。抑制胰島淀粉樣多肽形成，可以減少胰島淀粉樣多肽對β-細胞的細胞毒性，促進胰島素的分泌。因此，胰島淀粉樣多肽抑制認為是治療糖尿病的靶點。盡管如此，并沒有成熟開發的胰島淀粉樣多肽抑制劑問世，用于預防或治療糖尿病。

發明內容：

本發明目的是針對現有降血糖的藥物的特點，設計一種抑制劑2，能有效治療糖尿病。

技術方案

一種胰島淀粉樣多肽抑制劑2，其序列為VLSVAALNHLDKATPIESH。所述抑制劑2的制備方法，其特征在于：采用Fmoc保護的固相合成技術制備，采用Fmoc保護的固相合成技術制備，Rink酰氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮唑和N,N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。所述抑制劑2在預防或治療糖尿病及糖尿病并發癥中的應用。所述的糖尿病并發癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變。抑制劑2可通過多種給藥方式預防或治療糖尿病及糖尿病并發癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。

有益結果：

本發明中的胰島淀粉樣多肽抑制劑2，可以靶向抑制胰島淀粉樣多肽形成，達到預防或治療糖尿病的效果。更優選是治療糖尿病和/或糖尿病并發癥藥物中的用途。所述的糖尿病包括I型糖尿病和II型糖尿??；所述的糖尿病并發癥包括但不限于：糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變等。

具體實施方式

實施例1

多肽的化學合成方法

抑制劑2用Fmoc保護的固相合成技術制備。合成反應按照抑制劑2序列從C端向N端進行，Rink酰氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體(可在Advanced?Chem?Tech公司購得)上有自由氨基。每一步連接過程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍于載體上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羥基苯并三氮唑和N,N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，進行連接反應，每次氨基酸的連接反應之后，用吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:1:0.5)的混合物來封閉未連接的自由氨基，封閉反應10分鐘。下一個氨基酸連接之前，都要把載體上的Fmoc-基團去掉，去Fmoc-基團使用含20％哌啶的二甲基甲酰胺，需15分鐘。最后，當所有氨基酸殘基順序連接之后，抑制劑2用98％三氟乙酸從載體上切割下來，切割在室溫下進行2小時。

應用上述化學條件可合成并獲得抑制劑2，序列為VLSVAALNHLDKATPIESH，該序列為全新序列。也可委托上海生工合成。

實施例2

胰島淀粉樣多肽抑制劑2的體外細胞凋亡的測定

本實驗研究了胰島素淀粉樣多肽抑制劑2抑制胰島瘤細胞(INS-1細胞)凋亡的作用。當細胞用10μmol/L胰島素樣淀粉多肽處理后，經TUNEL染色后發現與培養基對照組相比出現了很多綠色亮點，說明體系中存在凋亡的細胞。當20μmol/L胰島素淀粉樣多肽抑制劑2與胰島素淀粉樣多肽共孵育后，鏡檢看到比單純加胰島素樣淀粉多肽的對照組較少的綠色亮點。對拍攝照片進行計數并統計后，發現用10μmol/L胰島素樣淀粉多肽處理的細胞凋亡率約為65.0％，而20μmol/L抑制劑2與胰島素樣淀粉多肽共同處理的細胞凋亡率減少到30.2％(p<0.05)。并且只用20μmol/L抑制劑2處理的細胞的凋亡情況與培養基對照組并無明顯差別，說明抑制劑2顯著減少了胰島素樣淀粉多肽誘導的細胞凋亡，但此濃度的抑制劑2自身對細胞沒有毒性作用。