[發(fā)明專利]一種發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410508761.8
• 申請(qǐng)日: 2014-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104195201A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張寶榮;袁昉;王繪磚;李敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北圣雪大成制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12P19/52
• 分類號(hào): C12P19/52;C12R1/46
• 代理公司: 石家莊元匯專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 劉聞鐸

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

新霉素由弗氏鏈霉菌(Streptamyces?fradiae)產(chǎn)生，是氨基糖苷類廣譜抗生素，對(duì)革蘭氏陰性菌、陽(yáng)性菌及結(jié)核桿菌都有較好的作用。新霉素對(duì)金葡菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌及痢疾桿菌敏感，對(duì)大腸桿菌最敏感，臨床上一般口服用于治療腹瀉，對(duì)大腸桿菌引起的小兒腹瀉療效較好，亦可用于腹部及手術(shù)前用藥。新霉素局部應(yīng)用，對(duì)敏感菌所致的皮膚粘膜感染如膿瘡、癤、潰瘍及燒傷等效果也很好。

目前新霉素的主要生產(chǎn)方式為生物發(fā)酵，國(guó)內(nèi)僅有為數(shù)不多的幾個(gè)廠家生產(chǎn)，主要由于產(chǎn)量很低，生產(chǎn)成本高，文獻(xiàn)中新霉素菌種選育與發(fā)酵工藝的研究報(bào)道中有機(jī)碳源為玉米淀粉，發(fā)酵單位較低，如：新霉素發(fā)酵工藝研究II.Streptomyces?fradlae?61-7-12菌株發(fā)酵，最高發(fā)酵單位只有2200U/mL。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的是發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素，發(fā)酵單位較低的技術(shù)問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人提供了以下技術(shù)方案。

一種發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括有機(jī)碳源、有機(jī)氮源、無(wú)機(jī)鹽和淀粉酶，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中有機(jī)碳源的濃度為60-110g/L。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中有機(jī)碳源的濃度為70-100g/L，優(yōu)選85-95g/L，最優(yōu)選90g/L。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中有機(jī)氮源的濃度為20-50g/L，優(yōu)選40g/L。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述有機(jī)碳源優(yōu)選小麥淀粉、糊精、麥芽糖、玉米淀粉、甘油、葡萄糖中的一種。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述有機(jī)氮源優(yōu)選豆粕粉、、酵母膏、牛肉粉中的一種。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述無(wú)機(jī)鹽為硫酸銨、磷酸氫二鈉和碳酸鈣。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述硫酸銨的濃度為4-10g/L，優(yōu)選8g/L。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述磷酸氫二鈉的濃度為0.1-0.5g/L，優(yōu)選0.1-0.3g/L。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述淀粉酶為α-淀粉酶。

上述發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述淀粉酶的濃度為1g/L。

本發(fā)明所述發(fā)酵培養(yǎng)基，通過(guò)限定有機(jī)碳源的濃度可以實(shí)現(xiàn)27000U/mL以上。

通過(guò)限定有機(jī)氮源的濃度可以實(shí)現(xiàn)33310U/mL以上。

所優(yōu)選的有機(jī)碳源能夠?qū)崿F(xiàn)19000U/mL以上。

所優(yōu)選的有機(jī)氮源能夠?qū)崿F(xiàn)30200U/mL以上。

本發(fā)明所述發(fā)酵培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽選擇硫酸銨、磷酸氫二鈉和碳酸鈣的混合物，并限定硫酸銨的濃度為4-10g/L，優(yōu)選8g/L，磷酸氫二鈉的濃度為0.1-0.5g/L，優(yōu)選0.1-0.3g/L，碳酸鈣的濃度為25g/L，其中，硫酸銨的作用是提供菌體前期生長(zhǎng)所需氮源，磷酸氫二鈉的作用是提供合成菌體所需磷源，碳酸鈣的作用是調(diào)節(jié)菌體代謝過(guò)程中的pH并提供一定的鈣離子。

本發(fā)明所述發(fā)酵培養(yǎng)基中淀粉酶為α-淀粉酶，其濃度優(yōu)選1g/L，是由于在此濃度下淀粉糊化較好。

本發(fā)明通過(guò)篩選發(fā)酵法生產(chǎn)新霉素所使用的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及各成分在培養(yǎng)基中的濃度，得到的發(fā)酵培養(yǎng)基有利于被弗氏鏈霉菌利用，能大幅提高新霉素的發(fā)酵單位，從而提高新霉素生產(chǎn)企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。

具體實(shí)施方式

通過(guò)本發(fā)明可使發(fā)酵單位達(dá)到40000U/mL以上，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。

實(shí)施例1

稱取小麥淀粉90g，豆粕粉40g，硫酸銨8g，磷酸氫二鈉0.1g，碳酸鈣25g，淀粉酶1g，飲用水定容至1L，接入新霉素產(chǎn)生菌弗氏鏈霉菌的種子培養(yǎng)物，接種量為15％，溫度35℃，培養(yǎng)10d放瓶，得到新霉素的發(fā)酵單位為33310U/mL

實(shí)施例2-8

發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如表1所示，發(fā)酵方法同實(shí)施例1。

表1

實(shí)施例9-12

發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如表2所示，發(fā)酵方法同實(shí)施例1。

表2

實(shí)施例13-15

發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如表3所示，發(fā)酵方法同實(shí)施例1。