[發明專利]一種定量快速篩選抑制黃曲霉毒素產生的活性物質的方法

在審

• 申請號: 201410508087.3
• 申請日: 2014-09-29
• 公開（公告）號: CN104293882A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 閆培生;王凱;曹立新;高秀君;吳晗琪
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學（威海）
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種定量快速篩選抑制黃曲霉毒素產生的活性物質的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）所使用的黃曲霉毒素指示菌株為寄生曲霉DM菌株；

（2）所使用的液體培養基配方組成為酵母粉10g，蔗糖50g，去離子水1000mL；

（3）將一定質量或濃度的微生物發酵產物、植物提取物、天然產物、或化學合成產物，加入上述液體培養基中，混勻后取200-500微升加入到微量液體培養器中作為處理組，同時取200-500微升空白培養液加入到另一微量液體培養器中作為對照組；

（4）向微量液體培養器中無菌操作接入5-10微升寄生曲霉DM菌株的分生孢子懸液，在28度恒溫培養箱中培養3-6天后，觀測培養結果；

（5）目測處理組和對照組的寄生曲霉DM菌株的菌絲生長和橘紅色降散盤衣酸的產生狀況，凡是能抑制DM菌株菌絲中橘紅色降散盤衣酸的產生和/或菌絲生長的處理組，即含有能抑制黃曲霉毒素產生的活性物質；

（6）定量測定抑毒率和抑菌率，將目測有抑制效果的微量液體培養器置入離心機中，在1000轉/分下離心1分鐘后，稱量處理組和對照組的菌絲體鮮重，計算抑菌率；然后，將菌絲體置入甲醇/氫氧化鈉（體積重量比為9：1）溶液中，提取菌絲體中的橘紅色降散盤衣酸30-40分鐘，在分光光度計中于560nm處測量處理組和對照組的提取液的吸光值，計算抑毒率；

（7）根據抑毒率和/或抑菌率的計算結果，選擇抑制率在90-100%的處理組為具有顯著抑制黃曲霉毒素產生的活性物質。