[發(fā)明專利]一種雞柔嫩艾美爾球蟲病抗性個體選擇育種抗性指標(biāo)估計方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410506129.X
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104255657A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 戴國俊;楊建生;林雨鑫;張菁菁;張根喜;王金玉;謝愷舟;孫明明;顧玉萍;王永娟
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A01K15/00
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種通過雞球蟲疫苗免疫估計攻毒后抗性指標(biāo)的方法。

背景技術(shù)

雞球蟲病是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)殖企業(yè)的流行性急性寄生蟲病，以10～60日齡的雞發(fā)病率最高，主要特征是患雞消瘦、食欲下降、貧血和血痢，病愈后雞生長受阻，增重和產(chǎn)蛋均會受到影響。全世界每年因雞球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)30億美元，而我國每年用于防治雞球蟲病的藥物費用也達(dá)到了數(shù)億元人民幣，占雞病全部防治費用的近三分之一。長期以來，雞的球蟲病以藥物防制為主，但是如果長期使用一種藥物不但會產(chǎn)生雞機(jī)體耐藥性的問題，降低藥物的防治效果，增加養(yǎng)殖成本。大量研究表明雞球蟲病抗性在同一品種內(nèi)或不同品種間存在變異性，這給雞球蟲病抗性選擇提供了依據(jù)。通過大劑量雞球蟲孢子化軟囊攻毒可以測定相應(yīng)的抗性指標(biāo)，但攻毒風(fēng)險大，要有專門的設(shè)施條件，難以實施和推廣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是探明雞球蟲疫苗免疫和攻毒后所選抗性指標(biāo)的關(guān)系，從而通過免疫而不是攻毒，估計抗性指標(biāo)，為常規(guī)育種方法提供可靠且活體可測的抗性指標(biāo)，從而實現(xiàn)雞球蟲病抗性個體的選擇育種。

本發(fā)明的原理是：雞球蟲疫苗(為孢子化軟囊)是一種經(jīng)改良的，能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，會引起機(jī)體內(nèi)某些細(xì)胞因子、抗氧化成分發(fā)生改變的，但又不會導(dǎo)致雞發(fā)生球蟲病的雞球蟲孢子化軟囊，或者是非改良的，劑量較小的(非致病劑量)雞球蟲孢子化軟囊。由于首次免疫以及間隔一定時間后攻毒，均會導(dǎo)致雞機(jī)體內(nèi)某些細(xì)胞因子、抗氧化成分發(fā)生改變，且這種改變均受遺傳等因素的共同影響，所以免疫后攻毒抗性指標(biāo)間存在內(nèi)在聯(lián)系。

本發(fā)明所述的雞球蟲病抗性個體的選擇育種方法，對待篩選樣本進(jìn)行雞球蟲疫苗免疫后測定血漿中下述5種抗性指標(biāo)：過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和γ干擾素(IFN-γ)，然后利用預(yù)先建立的各抗性指標(biāo)的回歸方程，由雞球蟲疫苗免疫后測定的上述5個抗性指標(biāo)準(zhǔn)確估計雞柔嫩艾美爾球蟲攻毒(感染)后各指標(biāo)的相應(yīng)濃度，用于非攻毒(感染)條件下利用上述5個抗性指標(biāo)進(jìn)行雞球蟲病抗性個體選擇；所述抗性指標(biāo)的回歸方程是指雞球蟲疫苗免疫后和攻毒后該抗性指標(biāo)的數(shù)量關(guān)系。

所述的回歸方程，通過下述方法建立：對苗雞進(jìn)行雞球蟲疫苗免疫后測定血漿中各抗性指標(biāo)，然后再對苗雞進(jìn)行攻毒后測定血漿中各抗性指標(biāo)，建立免疫后和攻毒后同一抗性指標(biāo)的回歸方程；

具體的操作方法可以是：剛出殼的苗雞用不含抗生素的飼料飼養(yǎng)至9日齡時分別按每羽份含有孢子化卵囊1100個±10％的正典雞球蟲病四價活疫苗飲水免疫和500個雞柔嫩艾美爾球蟲(E.tenella)孢子化卵囊經(jīng)口灌服免疫，17日齡時用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿中NO(μmol/mL)、CAT(ng/mL)、SOD(ng/mL)、IL-17(ng/L)、GSH-PX(U/mL)、MDA(μmol/mL)、IL-2(ng/L)、IL-16(ng/L)、IFN-γ(μmol/mL)和β-C(ng/mL)濃度。上述試驗雞仍然用不含抗生素的飼料飼養(yǎng)至39日齡，然后攻毒，也即經(jīng)口灌服2.5萬個E.tenella孢子化卵囊，47日齡時同樣用ELISA方法測定血漿中NO(μmol/mL)、CAT(ng/mL)、SOD(ng/mL)、IL-17(ng/L)、GSH-PX(U/mL)、MDA(μmol/mL)、IL-2(ng/L)、IL-16(ng/L)、IFN-γ(μmol/mL)和β-C(ng/mL)濃度。建立用于雞球蟲疫苗免疫后測定的上述抗性指標(biāo)估計30d后雞柔嫩艾美爾球蟲攻毒后相應(yīng)各抗性指標(biāo)的濃度的回歸方程。

本發(fā)明通過建立免疫和攻毒(球蟲感染)后抗性指標(biāo)間的關(guān)系，用于非攻毒條件下雞球蟲病抗性個體選擇。而球蟲疫苗免疫是各雞場常規(guī)工作，本發(fā)明方法能實現(xiàn)雞球蟲病常規(guī)選育，方法安全，意義重大。

具體實施方式

實施例一