[發(fā)明專利]用于念珠菌菌種鑒定和基因突變檢測(cè)的核酸膜條和試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410503015.X
• 申請(qǐng)日: 2014-09-26
• 公開（公告）號(hào): CN104263833A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裘惠良;鄭銀娜;鄒耀東;田潔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州美聯(lián)生物科技有限公司;杭州千基生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/72
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及念株菌的診斷試劑，尤其涉及一種可同時(shí)用于念珠菌菌種鑒定和基因突變檢測(cè)的核酸膜條和試劑盒。

背景技術(shù)

念珠菌性陰道炎，又稱外陰陰道念珠菌病(Vulvovaginal?candidiasis，VVC)是婦產(chǎn)科的常見病，在各年齡段育齡婦女中都普遍存在的一種生殖系統(tǒng)感染，75％的女性一生中至少患過一次霉菌性陰道炎。

白色念珠菌(C.albicans)是念珠菌性陰道炎最常見的致病菌，約占70～90％。同一宿主可以攜帶多種念珠菌，而不同基因型的同種念珠菌可以定植在宿主的相同或者不同部位。近年來，隨著抗生素等廣泛應(yīng)用，念珠菌性陰道炎的病原菌菌譜也發(fā)生了改變。光滑念珠菌(C.glabrata)、克柔念珠菌(C.krusei)、熱帶念珠菌(C.tropicalis)、近平滑念珠菌(C.parapsilosi)等非白色念珠菌引起念珠菌性陰道炎的病例逐漸增多。

目前的研究多以小范圍流行病學(xué)調(diào)查為主，不同地區(qū)的發(fā)病率不完全相同，病原菌組成也有一定差別。一項(xiàng)澳大利亞研究顯示，在5802名常規(guī)體檢者中，念珠菌性陰道炎的患病率為21％，而在這些患者中，有11％為非白色念珠菌感染引起的。印度的Jindal?N等人對(duì)350名16-45歲、主訴具有陰道分泌物增多或陰道搔癢等癥狀的女性患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其中82人念珠菌培養(yǎng)呈陽性，約占23.4％。其中白色念珠菌占全部念珠菌感染的74.4％，而非白色念珠菌感染為23.4％。非白色念珠菌感染又以光滑念珠菌(9.11％)居多，其次依次為熱帶念珠菌(5.6％)、克柔念珠菌(3.6％)、近平滑念珠菌及季也蒙念珠菌(2.43％)。羅永慧等人在探討女性生殖道念珠菌感染的菌群分布時(shí)發(fā)現(xiàn)，白色念珠菌雖然仍為主要的致病菌(66.7％)，但非白色念珠菌的比例呈上升趨勢(shì)，除了光滑念珠菌、熱帶念珠、克柔念珠菌以外，還分離到了葡萄牙念珠菌、近平滑念珠菌、釀酒念珠菌、挪威念珠菌。

目前臨床常用的治療真菌深部感染的藥類主要有多烯類，如兩性霉素B、制霉菌素脂質(zhì)體；氮唑類，如酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、伏力康唑、帕索康唑等；丙烯胺類，如特比奈芬；氟嘧啶類，如5-氟胞嘧啶等。抗念珠菌藥物眾多，念珠菌性陰道炎治療對(duì)其感染的不同類型念珠菌，應(yīng)進(jìn)行針對(duì)性用藥。白色念珠菌外陰陰道炎可選用藥物有克霉唑、制霉菌素等藥物；光滑念珠菌陰道感染可選用布康唑、伊曲康唑、氟康唑等藥物；熱帶念珠菌陰道感染可選用特康唑、伊曲康唑等藥物，克柔念珠菌感染可選用克霉唑。

自從多種陰道局部用藥和口服哇類抗真菌藥物的問世以來，各類藥物廣泛應(yīng)用，引起念珠菌性陰道炎的病原菌發(fā)生改變，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，非白色念珠菌的感染率和耐藥率也不斷增高。部分病例反復(fù)發(fā)作，成為頑固性病例。臨床上念珠菌的耐藥性問題已不容忽視，積極開展實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查，明確引起陰道感染的念珠菌種類，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果針對(duì)性治療，以盡可能減少耐藥菌株的出現(xiàn)，對(duì)提高念珠菌性陰道炎的治愈率具有重要意義。

常見念珠菌種類：1)白色念珠菌(cal)；2)光滑念珠菌cp；3)熱帶念珠菌(ctr)；4)近平滑念珠菌(cpa)；5)克柔念珠菌ckr?6)季也蒙念珠菌cgu?7)葡萄牙念珠菌(clu)等。

白色念珠菌對(duì)唑類藥物的耐藥機(jī)制：藥物作用靶位變化：ERG11基因的突變、ERG11基因過度表達(dá)、ERG11基因拷貝數(shù)增加；藥物外排增加：CDR1、CDR2和MDR1基因表達(dá)增加；細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)：EGR失活、鈣調(diào)蛋白活化蛋白激酶、生物膜的形成。其中生物膜的形成導(dǎo)致高度耐藥性。

現(xiàn)有技術(shù)或產(chǎn)品：臨床常用的念珠菌檢測(cè)方法：(1)直接鏡檢法：取陰道深部分泌物涂于玻片上，滴上數(shù)滴10％的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液，顯微鏡下檢查可見菌球及芽孢，此種方法的檢出率可達(dá)60％。(2)涂片染色法：同法取分泌物做涂片，固定后用革蘭氏染色，油鏡下可觀察到成群的革蘭氏性飽子，微菌絲及菌絲，此法陽性率80％。(3)培養(yǎng)法：當(dāng)患者有真菌感染癥狀，上述兩種方法檢查陰性時(shí)可取培養(yǎng)法，將標(biāo)本接種在培養(yǎng)基上，3-4天后出現(xiàn)菌落，鏡檢可見芽孢群和菌絲，此法陽性率最高。上述檢測(cè)方法的缺陷：直接鏡檢法或者涂片染色法陽性率較低，在80％以下，達(dá)不到臨床要求；同時(shí)以上三種方法均不能進(jìn)行菌種鑒定，達(dá)不到區(qū)分不同念珠菌的目的。