[發(fā)明專利]一種Poly (A)聚合酶活性測定方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410502196.4 | 申請日： | 2014-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN104357543A | 公開（公告）日： | 2015-02-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐曉昱 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京諾唯贊生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/48 | 分類號： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 南京正聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 210014 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 poly 聚合 活性 測定 方法 | ||
1.?一種Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根據(jù)單鏈模板合成引物，然后進行PAP酶催化的加尾反應(yīng)，反應(yīng)完成后與單鏈模板退火，隨后在足量沒有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶存在下進行聚合反應(yīng)生成雙鏈DNA，最后測定聚合反應(yīng)完成后反應(yīng)體系中雙鏈DNA的相對量，并通過該檢測結(jié)果推導(dǎo)出Poly?(A)聚合酶活性程度，其中所用單鏈模板上引物3’方向上第一位的堿基不是t。
2.?如權(quán)利要求1所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，反應(yīng)體系中雙鏈DNA的相對量是利用僅與雙鏈DNA或僅與單鏈DNA結(jié)合的熒光染料，利用熒光法檢測得到的，并且雙鏈DNA的相對量是以熒光強度表示的。
3.?如權(quán)利要求2所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所采用的熒光染料是雙鏈DNA特異性熒光染料。
4.?如權(quán)利要求3所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所述熒光染料是picogreen染料。
5.?如權(quán)利要求1所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所采用的單鏈模板是單鏈環(huán)狀DNA模板。
6.?如權(quán)利要求5所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所采用的單鏈模板是M13噬菌體單鏈DNA。
7.?如權(quán)利要求6所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所用的引物是5’-aagccatccgcaaaaatgacctct-3’。
8.?如權(quán)利要求1所述的Poly?(A)聚合酶活性測定方法，其特征在于，所采用的DNA聚合酶是Klenow?DNA聚合酶exo-突變體。
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